液相色譜梯度洗脫中柱溫的影響

許多色譜工作者在操作液相色譜時，色譜柱是在室溫環境下工作的。如果實驗室的溫度能保持不變的話，不會有什么大問題。但大多數的工作環境溫度是不斷變化的，因此若想將在某實驗室開發的一種液相色譜方法應用到其他實驗室的話，溫度的差別就會引起較復雜的問題。溫度的影響在所有的色譜分析方式中都是存在的，本文就來討論液相色譜方法中的梯度洗脫方式受溫度影響的問題。

等度保留

大多數色譜工作者知道等度洗脫時溫度會影響保留時間。圖1顯示了三個不同溫度下的分離結果。我們發現當溫度升高時所有的色譜峰都前移了，等度洗脫時一般溫度每升高一攝氏度保留時間會縮短1-3%，在圖1中，保留時間變化率約為2%/℃。

擁有溫控系統的實驗室一般都有全天候溫控設置，但這種設置可能引起室溫顯著變化，這對整夜運行的色譜系統就會有一些影響，例如，我們實驗室的夜間溫度就設為4～7℃。在不同的季節，實驗室的夜間溫度可能比正常工作日的溫度高或低，這種溫度的變化就會使色譜峰離開“保留時間窗”，造成連續進樣中產生一系列的無效數據。

還有一個可能的溫度影響因素就是色譜儀器在實驗室的位置。當色譜柱正對著空調的送風口時，雖然整個實驗室的溫度非常穩定，但色譜系統的溫度就會不斷的變化。這就是我們要使用柱溫箱的原因之一。

梯度保留

溫度變化對梯度洗脫和等度洗脫的影響趨勢是一樣的。圖2是苯胺和苯酸在三個溫度條件下的色譜圖。圖1中，20℃的溫度變化引起保留因子的變化大約為兩倍，然而在圖2中，40℃的變化使保留改變了約20%。平均來說，圖2中的色譜保留變化約為0.2%/℃。由此可見，溫度變化對梯度洗脫的影響要小于對等度洗脫的影響(假定本例具有普遍代表意義)。即便如此，若梯度洗脫時不控制溫度的話，保留值一般都會有較大的變化。

結論

我們發現柱溫在液相色譜梯度洗脫過程中扮演了一個重要的角色，首先，提高柱溫可以縮短保留時間，其次，我們看到柱溫還可以影響選擇性，最后，溫度的不平衡會導致峰扭曲變形。這些提醒我們，如果想得到穩定可靠的分離結果，色譜柱的溫度變化是不可忽視的。