液相色譜質譜分析時基質效應的評定方法

 通過評液相色譜-質譜定基質對分析物信號的影響程度,可大致將基質效應的評定歸結為2種方法:柱后注射法和提取后添加法。

  1 柱后注射法

  柱后注射法屬于動態方法,注射泵和接色譜柱的液相系統通過三通接頭與質譜連接。注射泵恒流注射一定濃度的分析物;生物樣品不添加分析物,提取后按已定的色譜條件進樣,記錄分析物的響應,此方法可考察整個色譜循環的基質影響。需要注意的是,注射分析物濃度應在所需要分析的濃度范圍內,若濃度過高,可能影響離子化效率而使結果出現偏差。

  柱后注射法可通過基質效應在一個色譜循環中的出現和消失,清楚地顯示不同樣品前處理的影響、分析柱的適用性和基質效應的作用機制。Taylor等以免疫抑制劑西羅莫司(50mg/L)柱后注射,選用3種不同的進樣方式對西羅莫司選用離子對m/z931.6/864.6進行選擇反應監測模式檢測發現,流動相進樣,整個色譜循環中信號無變化;乙腈沉淀蛋白的樣品,大部分色譜過程被抑制;經SPE法處理的樣品,在出峰較早的時間段內有較小的抑制,其后則信號強

  而穩定,沒有抑制。說明采用SPE法處理,基質效應不明顯,優于乙腈沉淀蛋白方法。

  2 提取后添加法

  采用提取后添加法建立數學模型評定基質效應在LC-MS/MS中使用的zui多,而且,此法可同時考察提取回收率。按照Matuszewski等的建議,比較3個不同條件下的信號峰面積平均值,其中,Set1:純的標準品溶液,Set2:不同來源的生物樣品基質提取后添加,Set3:不同來源的樣品基質提取前添加,則基質效應(ME)=Set2/Set1,提取回收率(RE)=Set3/Set2,方法過程效率(PE)=Set3/Set1。這種考察方法可更全面、客觀地量化評價基質效應。選取不同來源的空白基質,采用低、高2個濃度點,各條件下重復測定5個樣品。