液質聯用|國家藥監局發布化妝品中10種組分補充檢驗方法

國家藥監局近日發布《化妝品中非那雄胺等10種組分的測定》化妝品補充檢驗方法，涉及化妝品中羥基氟他胺、非那雄胺、尼魯米特、比卡魯胺、氟羅地爾、氟他胺、環丙孕酮、醋酸環丙孕酮、度他雄胺、依立雄胺的測定方法。該方法采用高效液相色譜儀分離，質譜檢測器檢測。根據保留時間和特征離子對的相對豐度比定性，定量離子對峰面積定量，以標準曲線法計算含量。

根據《化妝品監督管理條例》，國家藥監局批準《化妝品中非那雄胺等10種組分的測定》化妝品補充檢驗方法，現予發布。

1 范圍

本方法規定了化妝品中羥基氟他胺、非那雄胺、尼魯米特、比卡魯胺、氟羅地爾、氟他胺、環丙孕酮、醋酸環丙孕酮、度他雄胺、依立雄胺的測定方法。

本方法適用于膏霜乳類、液體類（水、油）、凝膠類、蠟基類、粉劑類化妝品中非那雄胺等10種組分的定性和定量測定。

2 原理

樣品經50%乙腈超聲提取后，采用高效液相色譜儀分離，質譜檢測器檢測。根據保留時間和特征離子對的相對豐度比定性，定量離子對峰面積定量，以標準曲線法計算含量。

3 試劑材料

除另有規定外，本方法中所用試劑均為分析純及以上規格，水為符合GB/T 6682規定的一級水。

3.1 甲醇，色譜純。

3.2 乙腈，色譜純。

3.3 50%乙腈溶液：取500 mL乙腈（3.2），用水稀釋至1000 mL，混勻。

3.4 甲酸，色譜純。

3.5 0.01%甲酸溶液：取0.1 mL甲酸（3.4），用水稀釋至1000 mL，混勻。

3.6 標準品：羥基氟他胺、非那雄胺、尼魯米特、比卡魯胺、氟他胺、環丙孕酮、醋酸環丙孕酮、度他雄胺、依立雄胺的標準品，純度均≥98%，氟羅地爾的標準品，純度＞95%。標準品的中文名稱、英文名稱、CAS號、分子式、相對分子質量、結構式詳見附錄A中的表A.1。

3.7標準儲備溶液：稱取羥基氟他胺、非那雄胺、尼魯米特、比卡魯胺、氟羅地爾、氟他胺、環丙孕酮、醋酸環丙孕酮、度他雄胺、依立雄胺標準品（3.6）各10 mg（精確到0.00001 g），分別置于10 mL棕色容量瓶中，用甲醇（3.1）溶解并定容至刻度，搖勻。作為羥基氟他胺等10種組分單標標準儲備溶液。標準儲備溶液均置于-18 ℃冰箱中避光保存。各組分儲備溶液濃度見表1。

3.8 混合標準儲備溶液：準確移取羥基氟他胺、非那雄胺標準儲備溶液（3.7）各0.5 mL，尼魯米特、比卡魯胺、氟羅地爾、氟他胺標準儲備溶液（3.7）各1.0 mL，環丙孕酮、醋酸環丙孕酮、度他雄胺、依立雄胺標準儲備溶液（3.7）各2.0 mL置于同一200 mL棕色容量瓶中，用50%乙腈溶液（3.3）定容至刻度，搖勻，制成混合標準儲備溶液。置于-18 ℃冰箱中避光保存。各組分標準溶液濃度見表1。

4 儀器和設備

4.1 高效液相色譜-三重四極桿質譜聯用儀。

4.2 分析天平：感量0.0001 g和0.00001 g。

4.3 超聲波清洗器。

4.4 渦旋混合儀。

4.5 高速離心機。

4.6 微孔濾膜：孔徑為0.22 μm有機相微孔濾膜。

5 試樣制備與保存

樣品應按照標簽標示的貯存條件進行保存。取樣前，應檢查封口的完整性，觀察樣品的性狀和特征，并使樣品混勻。打開包裝后，應盡可能快地取出所要測定部分進行分析，取樣后，應將樣品進行密封保存。

6 分析步驟

6.1 篩查用混合標準溶液

準確吸取混合標準儲備溶液（3.8）適量，用50%乙腈溶液（3.3）進行稀釋，配制成篩查用混合標準溶液。各組分篩查用混合標準溶液濃度見表1。

6.2 空白基質提取液

稱取空白試樣0.2 g（精確到0.0001 g），置于20 mL具塞比色管中，自“加入50%乙腈溶液（3.3）15 mL”起與樣品同法處理（6.5），作為空白基質提取液。

6.3 基質混合標準中間溶液

準確吸取混合標準儲備溶液（3.8）2 mL，置于10 mL棕色容量瓶中，用空白基質提取液（6.2）稀釋至刻度，搖勻，制成基質混合標準中間溶液。各組分基質混合標準中間溶液濃度見表1。

表1  非那雄胺等10種組分各溶液濃度

6.4 基質混合標準系列溶液

分別精密量取基質混合標準中間溶液（6.3）0.1 mL、0.25 mL、0.5 mL、0.75 mL、1.0 mL至10 mL容量瓶中，用空白基質提取液（6.2）配制得基質混合標準系列溶液，各組分基質混合標準系列溶液濃度見表2。基質混合標準系列溶液應現用現配。

表2  非那雄胺等10種組分的基質混合標準系列溶液濃度

6.5 樣品處理

稱取樣品0.2 g（精確至0.0001 g），置于20 mL具塞比色管中，加入50%乙腈溶液（3.3）15 mL，渦旋30 s，使分散均勻，超聲20 min，靜置至室溫，用50%乙腈溶液（3.3）定容至刻度，搖勻，以10000 r/min轉速離心5 min，吸取上清液，經0.22 μm濾膜過濾后，濾液作為供試品溶液備用（供試品溶液可根據實際濃度進行適當稀釋）。

6.6 儀器參考條件

6.6.1色譜條件

色譜柱：C₁₈柱（100 mm×2.1 mm，3.5 μm），或等效色譜柱；

流動相：A為0.01%甲酸溶液（3.5），B為甲醇（3.1）。梯度洗脫程序見表3；

流速：0.3 mL/min；

柱溫：25 ℃；

進樣量：1μL。

表3  梯度洗脫程序

6.6.2 質譜條件

離子源：電噴霧離子源（ESI源）；

監測模式：正離子、負離子多反應監測模式（MRM），監測離子對及相關參數設定見表4。

表4  非那雄胺等10種組分監測離子對及相關參數設定

*為推薦的定量離子。

注：當采用不同質譜儀器時，儀器參數可能存在差異，測定前應將質譜參數優化到最佳。

6.7 定性判定

取供試品溶液（6.5）與篩查用混合標準溶液（6.1）在相同分析條件下測定，樣品中如呈現定量離子對和定性離子對的色譜峰，被測組分的特征離子峰保留時間與篩查用混合標準溶液（6.1）對應的保留時間一致，且選擇的監測離子對的相對豐度比與相當濃度的篩查用混合標準溶液（6.1）的監測離子對的相對豐度比的最大偏差不超過表5的規定，則可以判定樣品中存在對應的組分。

表5  定性確證時相對離子豐度比的最大允許偏差

6.8 定量測定

取基質混合標準系列溶液（6.4）依次測定，以待測組分的系列濃度為橫坐標，待測組分的峰面積為縱坐標，進行線性回歸，繪制基質標準曲線，其線性相關系數應大于0.99。

取供試品溶液（6.5）測定，將對應的定量離子對色譜峰面積代入基質標準曲線。按“7”項下公式，計算樣品中待測組分的含量。

6.9 平行試驗

按以上步驟，對同一樣品進行平行實驗測定。

6.10空白試驗

除不加試樣外，均按上述測定條件和步驟進行。

7 結果計算

結果按式（1）計算：

………………………………………………(1)

式中：

ω—樣品中非那雄胺等10種組分的質量分數，mg/kg；

ρ—供試品溶液中非那雄胺等10種組分的質量濃度，μg/L；

V—樣品定容體積，mL；

m—樣品取樣量，g；

D—稀釋倍數（如未稀釋則為1）。

在相同條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。

8 精密度和準確度

多家實驗室驗證定量下限濃度回收率為80%～110%，相對標準偏差小于10%（n=6），中、高濃度回收率為90%～110%，相對標準偏差小于7.5%（n=6）。

9 檢出限和定量限

本方法中各組分的檢出限、定量下限及取樣量為0.2 g時的檢出濃度和最低定量濃度見表6。

表6  非那雄胺等10種組分的檢出限、定量下限、檢出濃度和最低定量濃度

10 圖譜

        圖1 非那雄胺等10種組分標準溶液的多反應監測提取離子圖

  （1.尼魯米特；2.羥基氟他胺；3.比卡魯胺；4.氟羅地爾；5.氟他胺；6.非那雄胺；7.環丙孕酮；8.醋酸環丙孕酮；9.度他雄胺；10.依立雄胺）