在以保留時間進行全掃描識別的分析中，TraceFinder處理軟件為組分檢測提供很高的選擇性（使用 5 ppm的窄提取窗口）。該軟件還提供另外三種自動定性確證方式。第一種方式是通過全掃描中母離子的同位素信息進行確證。圖5為環丙沙星實測（紅色）和理論（藍色）的同位素分布疊加圖。將分辨率設定為70,000，即使在如肌肉提取物的復雜基質中，某個化合物的濃度低至5ppb，其同位素分布的匹配仍不受干擾，確保了定性結果的可靠性。
第二種方式是通過MS/MS數據檢測已知碎片離子進行定性確證。以下結果為0.5ppb肌肉組織加標樣的檢測結果。圖6為vDIA模式下碎片離子確證的結果。由于vDIA譜圖采用一個寬隔離窗口生成，因此可以檢測多個母離子產生的碎片離子。Orbitrap MS/MS具備的高分辨率和高質量精度特性，使得碎片離子的選擇性識別成為可能，結合保留時間，可獲得可靠的確證結果。
圖5. 環丙沙星的同位素譜圖匹配，紅色為實測譜圖，藍色為理論同位素分布圖
圖6. 環丙沙星的碎片匹配結果，紅色為實測譜圖，藍色為確證碎片離子質量數
大多數常規方法能夠分析的目標化合物數量有限。因此，對候選藥物進行“后質譜分析”的再分析能力，有利于節省儀器/實驗時間和樣品。為了演示數據文件的回顧性分析，對肌肉組織加標樣品的vDIA數據文件進行寬范圍篩查。利用內置的1500種化合物數據庫進行未知物篩查，結果發現，數據庫中的部分結果與樣品中出現的其他組分高度匹配。圖7以皮質醇（氫化可的松）為例，展示了通過同位素匹配、碎片搜索和譜庫匹配得到的確證結果。
結論
本文利用Q Exactive Focus MS和UltiMate 3000 HPLC，建立了用于44個不同種類獸藥殘留篩查定量的可變數據非依賴采集方法。該新方法滿足所需的LOD靈敏度，并且能夠根據保留時間、精確m/z、同位素比和碎片離子等進行定性確認，性能優于歐盟的法規要求（EC/657/2002）。vDIA為非目標化合物和未知物的篩查確證提供了一種新方法，具備高靈敏度和高選擇性。TraceFinder軟件簡單易用，可應用在化合物識別和定性確證的全過程。vDIA方法達到了預期目標，能夠準確而靈敏地檢測非目標化合物（例如，44種組分列表中的物質），并能對未知化合物進行回顧性分析篩查。
圖7. TraceFinder軟件的非目標篩查結果