液質聯用法對人血漿中冰毒海洛因K粉等9種毒品的檢測

苯丙胺類興奮劑包括苯丙胺、甲基苯丙胺冰毒、3，4-甲二氧基苯異丙胺、3，4-亞甲二氧基甲基安非他明等，具有興奮中樞神經和周圍神經、抑制食欲、致幻等作用，并存在與氯胺酮混合使用情況。嗎啡類生物堿主要包括海洛因、嗎啡、6-單乙酰嗎啡和可待因止咳水等濫用藥物。世界反興奮劑機構明確規定這些都是運動員需要避免的違禁物質。

另外，公安部《對吸食、注射毒品人員成癮標準界定》的規定指出，凡查獲吸食、注射毒品者，應進行毒癮司法鑒定和吸毒違法行為的認定。同時，一些吸毒死亡案件中需要對血液進行毒品化合物定性定量分析；交通事故中駕駛者涉嫌服藥后的血液毒藥物分析等，這些都需要建立靈敏、準確可靠的血液中常見毒品化合物定性定量檢測方法。

目前，常見的生物檢材有血液、尿液、頭發等，檢測儀器多為氣相色譜儀（GC）、氣相色譜-質譜聯用儀（GC-MS）、高效液相色譜儀（HPLC）、高效液相色譜-質譜聯用儀（LC-MS/MS）等。無論使用何種檢材和檢測儀器，大多以化合物保留時間、特征碎片離子為指標來定性鑒別。相對于尿液和頭發，血液樣本存在更多的內源性物質，使得質譜檢測中有大量的碎片離子信號干擾，以及在化合物保留時間附近時常出現的“鬼峰”，容易產生假陽性，僅使用上述指標還是難以準確定性鑒別。

另外，雖然關于血液中這9種毒品的液質檢測方法有文獻報道，但都是檢測單一化合物或者某一類化合物，尚未見到關于多個和多類毒品化合物同時篩查檢測的文獻研究。而本研究建立了一種同時對血液中嗎啡類、氯胺酮和苯丙胺類等9種毒品化合物進行快速、準確定性定量檢測的超高效液相色譜-質譜聯用法（UPLC-MS/MS）。實驗采用濃度為10%三氯乙酸直接沉淀蛋白來處理血液樣本，較之文獻中的液-液萃取法和固相萃取法，更加簡單快速，提取液不需濃縮復溶，避免了過多中間環節的引入造成系統誤差；且成本低，適合大批量樣本檢測。處理后的樣品由超高效液相色譜-質譜儀檢測，沒有氣相色譜-質譜法中的衍生化步驟，也比一般的高效液相色譜-質譜法靈敏，準確度更高，檢測周期更短。

招募6個健康志愿者，早晨空腹抽取空白血液，置于加有肝素鈉抗凝劑的離心管中，取上清放入?20℃冰箱冷凍保存。

9種化合物的一級質譜分析顯示，在ESI正離子模式下都容易得到一個H+，形成較為穩定的[M+H]+準分子離子；通過調節質譜的錐孔電壓值（Cone）和碰撞能量（CE）值，9個化合物都會產生多個碎片離子，故每個化合物在篩選時各選取兩個特征離子對進行分析，并進一步對其Cone值和CE值進行優化，使離子對響應值最佳。定性分析檢測選取兩個離子對；定量分析檢測選取分子離子峰響應值最高的離子對。

本在預實驗中分別考察了甲醇、乙腈、10%三氯乙酸沉淀蛋白處理血漿樣品，結果顯示前2種方法處理空白血漿后的提取液檢測色譜圖中會出現嗎啡類化合物峰，表明內源性物質對檢測有干擾。采用10%三氯乙酸沉淀蛋白后測定，空白血漿提取液色譜圖中沒有干擾；同時通過調節流動相比例梯度洗脫，讓待測化合物在2min后出峰，前段時間洗除內源性物質，降低了基質效應的影響，準確度較好。

取空白人血漿200uL，分別配制9種化合物低、中、高質量濃度的質控樣品，按血樣處理方法進行處理。每個質量濃度5份同日測定，得日內精密度；連續測定3天，得日間精密度。以當日的隨行標準曲線計算樣品的測定質量濃度，與配制的質量濃度對照，求得方法的準確度。將質控樣品與空白血漿提取后加入標準品溶液后進樣測得的峰面積相比，考察方法的提取回收率。結果表明，9種化合物的RE<15%，準確度良好；日內、日間精密度（RSD）均<18%；相對提取回收率均>60%，RSD%均<15%。

考察9種化合物的低、中、高質量濃度樣品經處理后在儀器自動進樣室10℃12h內的穩定性。結果表明，經處理后的9種化合物待測樣品在上述條件保持穩定，RE%均小于20%。

本研究考察了9種化合物各自在不同的濃度下分子離子峰豐度比，發現豐度比值近似恒定，從量的角度排除了內源性物質和系統色譜“鬼峰”的干擾，是一個非常準確可靠的專屬性很強的定性指標。故可用保留時間、特征碎片離子峰及分子離子峰豐度比為指標來定性鑒別血液樣品中這9種常見毒品，同時也為生物樣本中其他類別藥物化合物的定性鑒別提供參考。另外，本文方法學考察結果表明，準確度、線性、提取率和精密度均良好，檢測限和定量限在ng·mL-1級，能夠對血液樣品中這9種毒品進行準確定量測定。

綜上，本實驗建立的人血漿中嗎啡、可待因、海洛因、氯胺酮、6-單乙酰嗎啡、3，4-甲二氧基苯異丙胺、3，4-亞甲二氧基甲基安非他明、苯丙胺、甲基苯丙胺的超高效液相色譜-質譜法具有分析時間短、操作簡便、準確度和靈敏度較高、重復性好等特點，在10min內可完成一個樣品多個成分的定性定量分析，適合大批樣本，成本低、能夠滿足實際檢測需要。另外，目前常見毒品除上述9種外，還包括美沙酮、氫化嗎啡、氧可酮、大麻類等，以及一些新型毒品，以后實驗室將繼續對這些化合物的檢測方法進行研究。