淋巴細胞分離的常用方法及原理

純淋巴細胞群的采集是利用單核細胞在37℃和Ca2+存在時，能主動粘附在玻璃、塑料、尼龍毛、棉花纖維或葡聚糖凝膠的特性，從單個核細胞懸液中除去單核細胞，從而獲得純淋巴細胞群。主要的方法有：①粘附貼壁法;②吸附柱過濾法;③磁鐵吸引法。

一、粘附貼壁法

將已制備的單個核細胞懸液傾于玻璃或塑料平皿或扁平小瓶中，移至37℃溫箱靜置1h左右，單核細胞和粒細胞均貼于平皿壁上，而未貼壁的非黏附細胞幾乎為純淋巴細胞，繼用橡皮刮下貼壁的細胞即為純單核細胞群。因B細胞也有貼壁現象，用本法分離的淋巴細胞群中B細胞有所損失。

二、吸附柱過濾法

將單個核細胞懸液注入裝有玻璃纖維或葡聚糖凝膠SephadexG10的柱層中，凡有黏附能力的細胞絕大部分被吸附而黏滯在柱層中，從柱上洗脫下來的細胞主要是淋巴細胞。此法簡單易行，對細胞極少損害。

三、磁鐵吸引法

1.利用單核細胞具有吞噬的特性，在單個核細胞懸液中加直徑為3?m的羰-基鐵顆粒，置37℃溫箱內短時旋轉搖動，待單核細胞充分吞噬羰-基鐵顆粒后，用磁鐵將細胞吸至管底，上層液中含較純的淋巴細胞。

2.淋巴細胞亞群的分離原則：根據相應細胞的特性和不同的標志加以選擇性純化。根據細胞的特性和標志選擇純化所需細胞的方法是陽性選擇法，而選擇性去除不要的細胞，僅留下所需的細胞為陰性選擇。常用的方法包括：①E花環沉降法;②尼龍毛柱分離法;③親和板結合分離法;④磁性微球分離法及熒光激活細胞分離儀分離法。