1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產生抗體，又可無限增殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤技術。這一技術上的突破不僅為醫學與生物學基礎研究開創了新紀元，也為臨床疾病的診、防、治提供了新的工具。
制備單克隆抗體包括動物免疫、細胞融合、選擇雜交瘤、檢測抗體、雜交瘤細胞的克隆化、凍存以及單克隆抗體的大量生產，要經過幾個月的一系列實驗步驟，下面按照制備單克隆抗體的流程順序，逐一介紹其實驗方法。
一、細胞融合前準備
(一) 免疫方案
選擇合適的免疫方案對于細胞融合雜交的成功，獲得高質量的McAb至關重要。一般要在融合前兩個月左右確立免疫方案開始初次免疫，免疫方案應根據抗原的特性不同而定。
1. 顆粒性抗原免疫性較強，不加佐劑就可獲得很好的免疫效果。下面以細胞性抗原為例的免疫方案:
初次免疫 1×10７／0.5ml ip (腹腔內注射)
↓ 2～3周后
第二次免疫 1×10７／0.5ml ip
↓ 3周后
加強免疫(融合前三天) 1×10７／0.5ml ip或iv(靜脈內注射)
↓
取脾融合
2. 可溶性抗原免疫原性弱，一般要加佐劑，常用佐劑：福氏完全佐劑，福氏不完全佐劑。要求抗原和佐劑等體積混合在一起，研磨成油包水的乳糜狀，放一滴在水面上不易馬上擴散呈小滴狀表明已達到油包水的狀態。商品化福氏完全佐劑在使用前須振搖，使沉淀的分枝桿菌充分混勻。
初次免疫 Ag 1～50μg 加福氏完全佐劑皮下多點注射
│ (一般0.8～1ml 0.2ml／點)
↓3周后
第二次免疫 劑量同上，加福氏不完全佐劑皮下或ip
│ (ip劑量不宜超過 0.5ml)
↓3周后
第三次免疫 劑量同上，不加佐劑，ip
│ (5～7 天后采血測其效價，檢測免疫效果)
↓2～3周后
加強免疫，劑量50～500μg為宜，ip或iv
↓3天后
取脾融合
目前，用于可溶性抗原(特別是一些弱抗原)的免疫方案也不斷有所更新，如①將可溶性抗原顆粒化或固相化，一方面增強了抗原的免疫原性，另一方面可降低抗原的使用量。②改變抗原注入的途徑，基礎免疫可直接采用脾內注射。③使用細胞因子作為佐劑，提高機體的免疫應答水平，促進免疫細胞對抗原反應性。
(二) 飼養細胞
在制備單克隆抗體過程中，許多環節需要加飼養細胞，如：在雜交瘤細胞篩選、克隆化和擴大培養過程中，加入飼養細胞是十分必要的。常用的飼養細胞有：小鼠腹腔巨噬細胞(較為常用)、小鼠脾臟細胞或小鼠胸腺細胞，也有人用小鼠成纖維細胞系3T3經放射線照射后作為飼養細胞，使用比較方便，照射后可放入液氮罐長期保存，隨用隨復蘇。
小鼠腹腔巨噬細胞的制備
小鼠采用與免疫小鼠相同的品系，常用BaLb／c小鼠6～10周齡
↓
拉頸處死 浸泡于75％酒精，消毒3～5分鐘
↓
用無菌剪刀剪開皮膚，暴露腹膜
↓
用無菌注射器注入6～8ml培養液
↓
反復沖洗，吸出沖洗液
↓
放入10ml離心管，1200轉／分離心5～6分鐘
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用20％小牛血清(NCS)或胎牛血清(FCS)的培養液混懸，調整細胞數1×10５／ml
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加入96孔板，100μl／孔
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放入37℃ CO2孵箱培養
一般飼養細胞在融合前一天制備，一只小鼠可獲得5～8×106腹腔巨噬細胞，若用小鼠胸腺細胞作為飼養細胞時，細胞濃度為5×106／ml，小鼠脾細胞為1×106／ml，小鼠的成纖維細胞 (3T3)1×105／ml，均為100μl／孔。