淋巴細胞轉化實驗

1.  采肝素抗凝血1~2毫升（1毫升血中加肝素20單位）充分混勻。37℃靜置1~2小時。紅細胞沉淀后，吸取血漿層并捎帶些紅細胞。移入另一無菌試管中。計算白細胞數然后2000 rpm 離心10分鐘。棄上清液。用199培養液將沉淀的白細胞配成1×10⁷/毫升細胞懸液。

2.  取細胞懸液0.6毫升（6×10⁶細胞）加入含有2.4毫升199培養液的培養瓶中。

3.  按每毫升營養液加30 ug PHA加入PHA。

4.  37℃孵育68~72小時。培養過程中，每天翻動培養瓶1~2次。

5.  培養后。振蕩培養瓶。將細胞重新懸起，然后移入試管中。

6.  1000 rpm 離心5分鐘。

7.  盡量棄去上清液，將沉淀物混勻，取一滴放在載玻片上，推成血膜（頭、體、尾分明）干燥，用瑞特氏染液染色）鏡檢。

8.  計算淋巴細胞的轉化率：油鏡下觀察每張玻片的頭、體、尾三段。每段各一縱列（目的是減少推片中細胞分布不均的誤差）。
 

9.  每張玻片記數200~400個細胞，計算轉化率其中頭部50~100，體部50~100，尾部100~200細胞。 一般認為轉化率的正常值為60~70%
 

淋巴細胞的轉化標準