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  • 發布時間:2020-07-23 17:02 原文鏈接: 游離凝固酶

      金黃色葡萄球菌(以下簡稱金葡菌),在空氣、水、土壤等外環境中廣泛存在,人和動物的鼻腔、咽喉、皮膚和腸道中金葡菌的攜帶率也較高。在一定條件下,金葡菌可致人體局部及全身感染并引起中毒性休克,其腸毒素可致食物中毒。

      金葡菌的致病因子眾多,包括溶血素、腸毒素、凝固酶等。溶血素作為金葡菌的外毒素,是造成金葡菌感染最重要的致病因子,溶血素能損傷紅細胞、血小板,破壞溶酶體引起局部缺血和壞死。研究發現,金葡菌菌株溶血素基因的攜帶率很高,但其溶血的表現卻差別很大。金葡菌溶血的表現以完全透明大溶血圈的β溶血為主,也有菌株表現為α溶血,還有相當多的金葡菌不溶血。另外,在葡萄球菌屬中,不少菌株如中間葡萄球菌、溶血性葡萄球菌、表皮葡萄球菌等,也有溶血現象。

      金黃色葡萄球菌腸毒素 (S.aureus enterotoxins,SE) 是由金葡菌分泌的一類能夠引起急性胃腸炎的蛋白質,SE具有很強的耐熱性,食物的通常蒸煮過程并不能使SE完全變性,SE還能抵抗胃腸道中蛋白酶的水解作用。產腸毒素金葡菌引起的食物中毒,是食源性疾病的常見類型,也是食品中金葡菌檢驗關注的重點。

      多數金葡菌菌體表面有結合的凝固酶(聚集因子),更多的金葡菌能分泌游離的凝固酶,游離凝固酶是一種胞外酶。凝固酶的致病性,主要表現在使菌體包被纖維蛋白而抵抗吞噬細胞的吞噬作用。檢測結合的凝固酶一般用玻片法,而試管法則可以檢測游離凝固酶以及結合的凝固酶。由于凝固酶試驗陰性的金葡菌極少,試管法也成了鑒定金葡菌的通用方法,但是某些菌株,如中間葡萄球菌、海豚葡萄球菌、施氏葡萄球菌凝固亞種的試管法凝固酶試驗也為陽性。因此從理論上講,國內外食品中金葡菌檢驗方法,檢驗的一般都是凝固酶陽性的葡萄球菌(coagulase-positive staphylococci)。有研究發現,金葡菌的凝固酶陽性與產腸毒素還有較高的符合率,產腸毒素者主要是凝固酶陽性的菌株。

      金葡菌對高溫處理工藝和常用的食品防腐劑非常敏感,食品中金葡菌的數量高,既指示原料的污穢不潔,也表示食品加工過程的質量衛生狀況不佳。另外金葡菌的數量越高,存在產腸毒素菌株的可能性越大。所以,金葡菌的數量也是食品安全標準中常見的限量指標。

      由于溶血現象并不是金葡菌的敏感特征,目前因為進食而造成人體局部或全身感染金葡菌的報道也并不多見,而且溶血試驗陽性與金葡菌產腸毒素之間并無相關性。因此,國外食品中金葡菌檢驗的權威方法,并未采用溶血試驗來鑒別金葡菌。

      由于血漿凝固酶試驗是鑒定金葡菌的“金標準”,以下詳細介紹試管法血漿凝固酶試驗的注意事項。

      1、待測菌應來自培養18-24小時的純培養物,生長不良或培養時間過長的菌株,可能因凝固酶的活性低而出現陰性結果。

      2、最好使用EDTA等不易被細菌分解的抗凝劑。因為腸球菌等細菌能分解檸檬酸鹽,從而導致用檸檬酸鹽抗凝的血漿出現凝集現象。此外,由于人血漿中存在金葡菌的抗體,綿羊血漿中凝固酶反應因子濃度低,一般采用兔血漿作為凝固酶的檢測試劑。

      3、接種細菌后,輕輕轉動(不要搖動)試管進行混勻,并于36℃培養6小時。由于一些金葡菌能產生大量的纖維蛋白酶使凝塊溶解,特別是溶解在培養早期出現的凝塊而導致陰性結果,為此必須每30分鐘觀察一次結果,尤其是在培養的頭一個小時。另外,有些金葡菌產生的凝固酶量比較少,培養6小時未能出現凝集,需要繼續培養至24小時才可觀察到凝集現象。

      4、輕輕傾斜(不要搖動)試管以觀察結果,最好根據凝集情況采用評分法對結果進行判斷。未出現凝集者,血漿凝固酶試驗為陰性;評分為3+以上者,判斷為血漿凝固酶試驗陽性;評分為1+、2+者,需要將待測菌重新純培養后,重復一次血漿凝固酶試驗,或采用耐熱核酸酶試驗、甘露醇發酵等其他方法對菌株進行確認。需要指出的是,一些大腸埃希氏菌能發酵甘露醇,且在血漿凝固酶試驗中出現弱凝集,此時可通過染色鏡檢來進行區分。

      5、采用金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的質控菌株,分別作為血漿凝固酶試驗的陽性和陰性對照。

      6、血漿凝固酶試驗的試管法結果與玻片法結果,有時并不完全一致。如施氏葡萄球菌施氏亞種的玻片法為陽性,試管法卻為陰性。


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