“pH值-溶解度”曲線的測定 取過量原料藥（可為預經微粉化處理），置8支具塞試管中，分別加pH1.0、……、8.0溶出介質適量，置37℃水浴振蕩過夜，形成過飽和溶液，取出后濾過，取續濾液經HPLC法測得溶解度，繪制曲線。對于難溶性藥物，對照品溶液可酌情采用純甲醇或純乙腈配制。 該曲線的繪制可提供眾多信息：如與X軸平行，說明各pH值溶解度幾近一致，由此可預測多條溶出曲線應重合；如曲線上有陡峭變化、甚至是有數量級差異，則可揭示多條溶出曲線形狀必會有所差異（即高低錯落），最低的那條曲線一定是溶解度最低的pH值介質，這為制劑研發方向提供了針對性與佐證素材。 當出現主成分在某pH值介質中極不穩定、溶解后即迅速分解，無法測定的情況，則該介質溶解度可不測定，其溶出曲線亦可免做。 pKa值的查詢與測定 pKa值也十分重要，可通過查詢或測定獲得。測定法可參照以下三篇文獻。若該值未涵蓋于四條標準溶出曲線pH值范圍，則研發時第5~6條溶出曲線就應測定該pKa值所對映的pH值介質或以上“pH值-溶解度曲線”上急劇變化的pH值，這些pH值溶出曲線的測定對于仿制制劑研發和曲線比對均具有十分重要的意義。 主成分在各溶出介質中的穩定性 為獲得準確試驗數據，該驗證必不可少。建議取原料藥粉末配制的溶液即可，無需取樣品溶出液。 采用溶出曲線“剖析”原研品 請參見張啟明、謝沐風撰寫的《采用多條溶出曲線評價口服固體制劑的內在質量》一文。 質量標準中各參數的制訂 在進行了以上對原研品和仿制品多pH值溶出介質中溶出曲線的測定后，才能科學客觀、合理全面地制訂質量標準。具體闡述如下： 溶出介質的選擇 速釋制劑：首先應滿足在該介質中最終溶出量達85%以上，然后可按下列情況分別選取。 根據該藥物在體內吸收主要消化道部位的生理pH值（適用于一般情況）； 能在一定程度上反映體內外相關性的pH值（適用于創新藥）； 最能體現不同來源制劑間彼此差異的pH值（適用于標準轉正/藥典起草、尤適合于我國大量仿制藥存在情形）； 最能反映生產工藝變化、偏差的pH值（適用于企業內控標準，用于批間樣品品質均一性的評價）； 溶出曲線中最低的pH值（適用于企業內控標準，用于應對國家市場檢查與監督）； 溶出數據精密度更佳的pH值（某些樣品在首選介質中精密度不佳時、更換為精密度更為理想的介質）。 當多條溶出曲線重合時（各時間點溶出量相差不超過10.0%），《日本橙皮書》傾向首選“水”。其出發點為：雖然水的pH值和表面張力會因來源不同而改變，且在試驗過程中也可能會因藥物影響或者溶解入二氧化碳使溶出行為發生變化，但考慮到上述可能性較小，且可通過事先驗證予以探明，故秉承環保、提高試驗效率等出發點，質量標準中首選水。而美國藥典鑒于以上問題的存在，傾向采用帶有pH值的介質。筆者更傾向日本作法，因水的pH值范圍5.0~7.0已被上述多條溶出曲線的pH值所涵蓋。當多條溶出曲線不重合，則可根據上述各針對性酌情擬定。 腸溶制劑：注意應該規定酸中介質（pH 1.0~1.2）和堿中介質（pH 6.8~7.2）釋放量的測定。酸中釋放量的測定現今愈發傾向通過測得準確數據予以表達、而非肉眼觀察外觀形狀進行控制（日本橙皮書皆采用此法），通常規定2 h不得過10%。為防止藥物在年輕人體內發生過量釋放，甚至在該階段可故意采用高轉速（如100轉），以進一步探明藥物的內在優良品質。 如主成分溶出后在酸性介質中不穩定旋即降解，即便立即測定也無法準確評估時，建議測定溶出杯中剩余固體顆粒所含主成分量，隨后用測得百分含量減去剩余百分含量，再除以測得百分含量，即為酸中釋放百分量。 現今，隨著市場上銷售的腸溶衣輔料已皆可在pH1.0~3.0范圍內包裹住藥片，使主成分釋放量合格，而經研究表明：人體內胃環境，隨年齡增長胃酸分泌逐漸減少（胃內pH值范圍1.2~7.6），如此再在pH 1.0~1.2范圍內測定已顯得毫無意義，故現今開始逐步測定pH4.5介質，規定依然是不得過10%溶出量。英國藥典自2008年始，“奧美拉唑腸溶膠囊/片”的制訂原則便是以此為依據，這樣的測定更有針對性和實用性，值得我們學習和借鑒。 堿中釋放量同速釋制劑：需要注意的是，腸溶衣對紫外測定時常有干擾，故強烈建議采用紫外-兩點相減法或HPLC法，否則極易出現溶出量均值高于含量3.0%以上的情況。 緩控釋制劑 首先應滿足在該介質中最終溶出量達80%以上。當體外多條釋放曲線重合時（酸中僅測定2h即可），建議首選水（pH5.0~7.0）作介質，既經濟又方便。絕不建議采用酸性介質，因任何人體內的十二指腸至小腸消化道器官是不存在該值的；也不建議參照人體內消化器官的標準值（pH1.0~1.2、4.0~4.5、6.8）采用不同時段、不同溶出介質（不斷調試）的費時費力方式、且此方式實驗誤差較大。當體外多條釋放曲線不重合時，建議選擇最終溶出量達80%以上的、最慢的那個pH值介質。 介質中胃蛋白酶和胰蛋白酶的加入 一般情況下，不建議在溶出介質中添加這些酶。但如某些藥物必須飯后服用、且生物等效性試驗需在“進食”狀態下進行時，則在仿制藥研發中必須進行“溶出介質中分別添加胃蛋白酶和胰蛋白酶的比對研究”，此時質量標準中亦應加入。另外，當硬膠囊劑使用囊殼為明膠膠囊時，為避免產生交聯現象影響溶出，也可加入，但需進行驗證。