實驗方法原理 在電場作用下,抗原在含定量抗體的瓊脂介質中泳動,二者比例在合適時在較短時間內形成狀似火箭或錐形的沉淀線,而此沉淀線的高度常與抗原量成正比關系,因此本法可以測定樣品中抗原的含量。
實驗材料 待檢血清
試劑、試劑盒 巴比妥緩沖液瓊脂粉
儀器、耗材 微量進樣器打孔器玻璃板電泳儀
實驗步驟
1. 抗體瓊脂板的制備:同單向擴散法,但注意稀釋液應用pH8.6離子強度0.05 M 的巴比妥緩沖液。
2. 打孔見下圖
3. 將用緩沖液稀釋的適宜濃度的參考血清及適當稀釋的抗原(人血清)分別加入各孔中,每孔10或20微升,要求加量準確而不外溢。
4. 把加完樣的免疫瓊脂板放入電泳槽中進行電泳,電壓4~6伏/厘米,電泳時間1~5小時,直到大部分抗原孔前端出現頂端尖窄而完全閉合的火箭狀沉淀線,關閉電源。
5. 取下瓊脂板,以抗原孔中心為起點,量出各火箭狀沉淀線的高度。同單向瓊脂擴散法繪制標準曲線,查出待檢血清中Ig含量。