1.熱啟動PCR概述:盡管Taq DNA聚合酶的最佳延伸溫度在72℃,聚
合酶在室溫仍然有活性。因此,在進行PCR反應配制過程中,以及在熱循環剛開始,保溫溫度低于退火溫度時會產生非特異性的產物。
熱啟動就是PCR儀達到變性溫度再加入Taq DNA聚合酶,從而抑制一種基本成分延遲DNA合成。
2.熱啟動PCR應用:如site-directed突變、表達克隆或用于DNA工程的遺傳元件的構建和操作
3.熱啟動PCR使用條件:好的引物設計
4.熱啟動PCR優缺點:
⑴優點:提高PCR特異性最重要
⑵缺點:方法十分煩瑣,尤其是高通量應用。