焦磷酸測序（Pyrosequencing）技術
焦磷酸測序技術(pyrosequencing)是由Nyren等人于1987年發展起來的一種新型的酶聯級聯測序技術，焦磷酸測序法適于對已知的短序列的測序分析，其可重復性和精確性能與SangerDNA測序法相媲美，而速度卻大大的提高。焦磷酸測序技術產品具備同時對大量樣品進行測序分析的能力，為大通量、低成本、適時、快速、直觀地進行DNA甲基化、SNP等單個/連續多個核苷酸變異進行實時定量檢測提供了非常理想的技術操作平臺。
一. 焦磷酸測序技術原理
焦磷酸測序技術是由4種酶催化的同一反應體系中的酶級聯化學發光反應。焦磷酸測序技術的原理是：引物與模板DNA退火后，在DNA聚合酶(DNA polymerase)、ATP硫酸化酶(ATP sulfurytase)．熒光素酶(1uciferase)和三磷酸腺苷雙磷酸酶(Apyrase)4種酶的協同作用下，將引物上每一個dNTP的聚合與一次熒光信號的釋放偶聯起來，通過檢測熒光的釋放和強度，達到實時測定DNA序列的目的。焦磷酸測序技術的反應體系由反應底物、待測單鏈、測序引物和4種酶構成。反應底物為5’-磷酰硫酸(adenosine -5’-phosphosulfat，APS)、熒光素(1uciferin)。
1.每次加入一個dNTP, 在聚合酶作用下產生一個焦磷酸（PPi）；
2. 硫酸化酶轉化PPi為ATP，ATP使熒光素酶發出熒光(產生的光強度與結合的核苷數量成正比).
3. 多余的dNTP被降解，開始新一個循環.
4. 測序結果
技術平臺：
QIAGEN公司PyroMark Q24，PyroMark Q48 Autoprep，PyroMark Q96 ID焦磷酸測序儀
焦磷酸測序實驗流程
焦磷酸測序技術應用
DNA甲基化檢測
全基因組甲基化水平檢測：LUMA法
SNP定量檢測/等位基因差異表達檢測
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標簽： 甲基化 焦磷酸測序 Pyrosequencing
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