1. 在白紙上畫出 1 cm2 的方塊，然后將玻片放在紙上。
2. 用 10 ul 的微量吸液器吸取混勻了的生牛乳樣品，放在玻片 1 cm2 區域的中央。
3. 用接種針將牛乳涂勻，并涂滿 1 cm2 的范圍。
4. 使涂片于空氣中慢慢干燥。將鐵絲試管架放在沸水浴中，然后置已干燥的涂片于試管架上，用蒸汽熱固定 5 min，待干。
5. 浸于美藍染液缶內染色 2 min。
6. 取出玻片，用吸水紙吸去多余的染料，晾干。
7. 再用水緩緩沖洗，晾干。
8. 油鏡下觀察細菌數，共數 30～50 個視野。
9. 計算
每毫升的細菌總數＝平均每視野的細菌數×500 000
因為：
一般油鏡的視野直徑為 0.16 mm
一個視野的面積＝0.082 × 3.1416＝0.02 mm2 ，化成 cm2 ，視野面積＝0.02 × 0.01＝0.0002 cm2 ，1 cm2 的視野數＝1.0 ÷ 0.0002＝5000
又因每 1 cm2 的牛乳量為 0.01 ml，即 1/100 ml，
則每一視野的牛乳量＝1/100×1/5 000＝1/500 000 ml
所以，一個視野中的 1 個細菌就代表 1 ml 牛乳中有 500 000 個細菌。因此 1 ml 牛乳中的細菌數＝一個視野的細菌數×500 000＝ 50 個視野的細菌數 ÷ 50×500 000 展開 | 