實驗方法原理
實驗材料 生牛乳 10 ml
儀器、耗材 10 ul 微量吸液器與吸嘴載玻片美藍染液(Levowitz-Weber 染料)缶顯微鏡水浴鍋試管架吸水紙
實驗步驟
1. 在白紙上畫出 1 cm2 的方塊,然后將玻片放在紙上。
2. 用 10 ul 的微量吸液器吸取混勻了的生牛乳樣品,放在玻片 1 cm2 區域的中央。
3. 用接種針將牛乳涂勻,并涂滿 1 cm2 的范圍。
4. 使涂片于空氣中慢慢干燥。將鐵絲試管架放在沸水浴中,然后置已干燥的涂片于試管架上,用蒸汽熱固定 5 min,待干。
5. 浸于美藍染液缶內染色 2 min。
6. 取出玻片,用吸水紙吸去多余的染料,晾干。
7. 再用水緩緩沖洗,晾干。
8. 油鏡下觀察細菌數,共數 30~50 個視野。
9. 計算
每毫升的細菌總數=平均每視野的細菌數×500 000
因為:
一般油鏡的視野直徑為 0.16 mm
一個視野的面積=0.082 × 3.1416=0.02 mm2 ,化成 cm2 ,視野面積=0.02 × 0.01=0.0002 cm2 ,1 cm2 的視野數=1.0 ÷ 0.0002=5000
又因每 1 cm2 的牛乳量為 0.01 ml,即 1/100 ml,
則每一視野的牛乳量=1/100×1/5 000=1/500 000 ml
所以,一個視野中的 1 個細菌就代表 1 ml 牛乳中有 500 000 個細菌。因此 1 ml 牛乳中的細菌數=一個視野的細菌數×500 000= 50 個視野的細菌數 ÷ 50×500 000
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