牛乳中酪蛋白的制備

實驗原理:

牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白兩種蛋白質。其中酪蛋白占了牛乳蛋白質的80%。酪蛋白是白色、無味的物質。不溶于水、乙醇及有機溶劑，但溶于堿溶液。牛乳在pH4.7時酪蛋白等電聚沉后剩余的蛋白質統稱乳清蛋白。乳清蛋白不同于酪蛋白，其粒子的水合能力強、分散性高，在乳中呈高分子狀態。

本法利用等電點時溶解度最低的原理，將牛乳的pH調至4.7時，酪蛋白就沉淀出來。用乙醇洗滌沉淀物，除去脂類雜質后便可得到純的酪蛋白。酪蛋白含量約為35g/L。

試劑和器材

一、試劑

95%乙醇；無水乙醚；乙醇—乙醚混合液 (V/V=1∶1) 。

0.2mol/L pH4.7醋酸—醋酸鈉緩沖液3000mL：

A液：稱取NaAc?3H2O 54.44g，定容至2000mL。

B液：稱取優級純醋酸（含量大于99.8%）12.0g定容至1000mL。

取A液1770mL，B液1230mL混合即得pH4.7的醋酸—醋酸鈉緩沖液3000mL。

二、材料

牛奶。

三、器材

離心機，抽濾裝置，精密pH試紙或酸度計，電爐，燒杯，溫度計。

操作方法

1．將25mL牛奶加熱至40℃。在攪拌下慢慢加入預熱至40℃、pH4.7醋酸緩沖液25mL。用精密試紙或酸度計調pH值至4.7。

將上述懸浮液冷卻至室溫。離心15min(3000r/min)。棄去清液，得酪蛋白粗制品。

2．用水洗沉淀三次，離心10min(3000r/min)，棄去上清液。

3．在沉淀中加入約10mL乙醇，攪拌片刻，將全部的懸濁液轉移至布氏漏斗中抽濾。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2 次。最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。

4．將沉淀攤開在表面皿上，風干；得酪蛋白純品。

5．準確稱重，計算酪蛋白含量（g/100mL牛乳）, 并和理論含量為3.5g/100mL牛乳相比較，求出實際得率。