SPE 和 LC 工作條件
載樣泵： 管路 A:100% 水
管路 B ： 100% 甲醇
載樣流速： 4.0 mL/min
清洗液： 20% 的甲醇 / 乙腈（ 30/70 ） +0.5% 甲酸
再平衡泵： A ： 50/50 的甲醇 / 丙酮
B ： 80/20 的乙酸乙酯 / 丙酮
C ： 80/20 的正己烷 / 丙酮
再平衡流速： 4.0 mL/min
萃取柱： Oasis HLB 2.1x 2 mm ， 25.0 μ m
分析柱： XBridge C18 2.1x 50 mm ， 3.5 μ m
結果和討論
圖 2 為添加了 0.5ppb 每種抗生素的牛奶樣品的具有代表性的提取離子色譜圖。抗生素在微量水平都具有良好的信號和峰形。對于食品樣品，樣品的復雜度要高于飲用水樣品，而且清洗步驟需要優化以最大程度的清除干擾物質，而不洗脫掉所感興趣的分析物。圖 3 為添加了 100ppb 紅霉素，分別用 5% 、 10% 、 20% 、 30% 和 40% 甲醇清洗的色譜圖。在圖 2 中， 20% 甲醇清洗與 5% 甲醇清洗相比，會產生更高的信號。 5% 甲醇的弱信號可歸因于離子抑制效應。可是，當清洗步驟中的有機相比例增加的過多時，信號的靈敏度由于部分洗脫而有下降趨勢。
圖 4 為紅霉素濃度從 1.0ppb 到 500.0ppb 、線性系數為 0.9902 的校正曲線圖。表 2 是在線和離線 SPE 萃取方案肩并肩的對比，從文獻到處理天然的牛奶樣品到適于 LC/MS 或 GC/MS 分析的理想形態。當評價在線 SPE/LC/MS/MS 和離線方案時，通常的萃取程序和溶劑、實驗室人員和時間的整體應用都是很重要的。其它的食品樣品有各種各樣的結構，在 SPE 萃取前可能需要其它的處理程序。例如，牛奶樣品在用 SPE 裝置進一步凈化前需要簡單的蛋白沉淀和離心。對于像
圖 2 添加了 0.5ppb 的牛奶的提取離子色譜圖
圖 3 牛奶提取的優化清洗
圖 4 紅霉素的校正曲線
水果和蔬菜這樣的固體樣品，使用萃取緩沖液的低溫碾磨或均質化步驟是優先考慮的方法。對于通常的萃取程序，很容易找到每個萃取步驟都使用廣大范圍的體積和時間的文獻報道。通常，使用 SPE 方案，上樣、清洗和洗脫體積都根據 SPE 裝置的床臺尺寸估量。這可以首先保證在每個步驟中 SP E 吸附劑的整體潤濕。一旦這個數值定下來，這可以增加數倍 ( 依賴于化合物 ) 確保多個體積置換以使清洗步驟最小化清除干擾和洗脫步驟最大化回收率。在實際的操作中，柱床上樣量誘捕能力的增加需要 SPE 程序中體積的增加；這最終會增加樣品制備時間和溶劑消耗量。
結論
在過去的這些年里，許多國家已經盡了很大努力來進一步提高他們的國內和進口的食品供應的安全性，以使消費者能夠享受安全的食品供應。正因為這樣，許多分析方法都可以得到，并在常規的分析中被使用。隨著最小化溶劑使用量和最大化實驗室人員使用的需求增
加，自動化平臺的使用絕對會滿足這些要求。這篇應用文獻描述了牛奶樣品中抗生素的自動化萃取和分析。傳統的萃取前處理步驟是極其消耗時間的；他們需要更大數量的化學品和各種各樣的試劑。使用 Waters AquaAnalysis 系統處理牛奶樣品的時間大約為 20min ，這與離線方案相比可以減少 70-90% 的時間。
表 2 牛奶樣品的離線和在線萃取方案的溶劑消耗量和處理時間
參考文獻
[1] U.S. FDA National Milk Drug Residue Database. Food and Drug
Administration, Center for Food Safety and Drug Administration, 2007.
Available online: http://www.cfsan.fda.gov/~ear/p-mis.html
[2]
W A Moats, M B Medina. Veterinary Drug Residues, ACS Symposium Series
636, American Chemical Society, Washington, DC, 1996, p.5.
[3] 43rd
Meeting of the Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives.
Evaluation of Certain Veterinary Drug Residues in Food, WHO Tech. Rep
Ser., No 855, 1995, p.85.
[4] J Wang, D Leung, S P Lenz. J. Agric. Food Chem. 54: 2873, 2006.|
[5] M Dubois, D Fluchard, E Sior, P H Delahaut. J. Chromatogr. B.753: 189, 2001.
[6] S B Turnipseed, W C Andersen, C M Karbiwnyk, M R Madson, K E Miller. Rapid Commun. Mass Spectrom. 22: 1467, 2008.