牛肉膏蛋白胨培養基制備實驗

實驗方法原理

牛肉膏蛋白胨培養基是一種應用最廣泛和最普通的細菌基礎培養基，有時又稱為普通培養基。由于這種培養基中含有一般細菌生長繁殖所需要的最基本的營養物質，所以可供作微生物生長繁殖之用。基礎培養基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCI。其中牛肉膏為微生物提供碳源、能源、 磷酸鹽和維生素，蛋白胨主要提供氮源和維生素，而NaCI提供無機鹽。在配制固體培養基時還要加人一定量瓊脂作凝固劑，瓊脂在常用濃度下96℃時溶化，實際應用時，一般在沸水浴中或下面墊以石棉網煮沸溶化，以免瓊脂燒焦。瓊脂在40℃時凝固，通常不被微生物分解利用。固體培養基中瓊脂的含量根據瓊脂的質量和氣溫的不同而有所不同。

由于這種培養基多用于培養細菌，因此要用稀酸或稀堿將其pH調至中性或微堿性，以利于細菌的生長繁殖。

牛肉膏蛋白胨培養基的配方如下：

牛肉膏：3.0 g

蛋白胨：10.0 g

NaCI：5.0 g

水：1 000 ml

pH：7.4-7.6

試劑、試劑盒 牛肉膏蛋白胨NaCI水瓊脂氫氧化鈉鹽酸

儀器、耗材 試管三角瓶燒杯量筒玻璃棒培養基分裝器天平牛角匙高壓蒸氣滅菌鍋pH試紙棉花牛皮紙記號筆麻繩紗布?

實驗步驟

一、稱量按培養基配方比例依次準確地稱取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放人燒杯中，牛肉膏常用玻璃棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶化后倒人燒杯。也可放在稱量紙上，稱量后直接放人水中，這時如稍微加熱，牛肉膏便會與稱量紙分離，然后立即取出紙片。

蛋白胨很易吸濕，在稱取時動作要迅速。另外，稱藥品時嚴防藥品混雜，一把牛角匙用于一種藥品，或稱取一種藥品后，洗凈，擦干，再稱取另一藥品。瓶蓋也不要蓋錯。
 

二、溶化
 

在上述燒杯中先加人少于所需要的水量，用玻棒攪勻，然后，在石棉網上加熱使其溶解，或在磁力攪拌器上加熱溶解（圖1）將藥品完全溶解后，補充水到所需的總體積，如果配制固體培養基時，將稱好的瓊脂放人已溶的藥品中，再加熱溶化，最后補足所損失的水分，在制備用三角瓶盛固體培養基時，一般也可先將一定量的液體培養基分裝于三角瓶中，然后按1.5%-2.0%的量將瓊脂直接分別加人各三角瓶中，不必加熱溶化，而是滅菌和加熱溶化同步進行，節省時間。


 

在瓊脂溶化過程中，應控制火力，以免培養基因沸騰而溢出容器。同時，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底燒焦。配制培養基時，不可用銅或鐵鍋加熱溶化，以免離子進入培養基中，影響細菌生長。
 

三、調 pH
 

在未調pH前，先用楂密pH試紙測量培養基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培養基中逐滴加 人1 mol/L NaOH邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙測其pH，直至pH達7.6。反之，用lmol/L HCl進行調節。
 

對于有些要求pH較精確的微生物，其pH的調節可用酸度計進行（使用方法可參考有關說明書）。
 

pH不要調過頭，以避免回調而影響培養基內各離子的濃度。配制pH低的瓊脂培養基時，若預先調好pH并在高壓蒸氣下滅菌，則瓊脂因水解不能凝固。因此，應將培養基的成分和瓊脂分來滅菌后再混合，或在中性pH條件下滅菌，再調整pH。
 

四、過濾
 

趁熱用濾紙或多層紗布過濾，以利某些實驗結果的觀察，一般無特殊要求的情況下，這一步可以省去（本實驗勿需過濾）。

五、分裝
 

1.  按實驗要求，可將配制的培養基分裝人試管內或三角燒瓶內。分裝裝置見圖2。
 

圖2 培養基分裝裝置

A.  漏斗分裝裝置；B. 自動分裝器 

1.  鐵架；2.  漏斗；3.  乳膠管；4.  彈簧夾；5.  玻管；6.  流速調節；7.  裝量調節；8.  開關

2.  液體分裝

分裝高度以試管髙度的1/4左右為宜。分裝三角瓶的量則根據需要而定，一般以不超過三角瓶容積的一半為宜，如果是用于振蕩培養用，則根據通氣量的要求酌情減少；有的液體培養基在滅菌后，要補加一定量的其他無菌成分，如抗生素等，則裝量一定要準確。

3.   固體分裝

分裝試管，其裝量不超過管高的1/5，滅菌后制成斜面。分裝三角燒瓶的量不超過三角燒瓶容積的一半為宜。
 

4.  半固體分裝

試管一般以試管髙度的1/3為宜，滅菌后垂直待凝。
 

分裝過程中，注意不要使培養甚沾在管（瓶）上，以免沾污棉塞而引起污染。

六、加塞
 

培養基分裝完畢后，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞（或泡沫塑料塞及試管帽等)，以阻止外界微生物進人培養基內而造成污染，并保證有良好的通氣性能。
 

七、包扎
 

加塞后，將全部試管用麻繩捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞， 其外再用一道麻繩扎好，用記號筆注明培養基名稱、組別、配制日期。三角燒瓶加塞后，外包牛皮紙，用麻繩以活結形式扎好，使用時容易解開，同樣用記號筆注明培養基名稱、組別、配制曰期（有條件的實驗室，可用市售的鋁箔代替牛皮紙，省去用繩扎，而且效果好。）

八、滅菌
 

將上述培養基以0.103 MPa，121℃，20 min高壓蒸氣滅菌。

九、擱置斜面
 

將滅菌的試管培養基冷至50℃左右（以防斜面上冷凝水太多），將試管口端擱在玻棒或其他合適高度的器具上，擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜（圖3）。
 

圖3 擺斜面

十、無菌檢查
 

將滅菌培養基放人37 ℃的溫室中培養24-48 h，以檢査滅菌是否徹底。