玉米赤霉烯酮免疫親和柱的使用方法（二）

分析步驟

玉米赤霉烯酮免疫親和柱的柱容量(最大吸附玉米赤霉烯酮)為1500ng，當樣品中玉米赤霉烯酮超過測定范圍時，請適當減小上柱體積，使其在檢測范圍內，計算出準確含量。

1） 樣品提取及稀釋：

谷物、糧食、花生及其制品、大豆、植物油、調料等樣品：（測定范圍0-1875 μg/kg） 稱取40g磨細的樣品，5g 氯化鈉；置于250mL具塞錐形瓶中，或勻質杯中。加入100mL乙腈/水（9+1）溶液。以均質器高速勻質提取2min，或搖床震蕩60min。取下蓋子，將提取物到入槽紋濾紙上，濾液收集于干凈的容器中。移取10 mL上步的濾液，置于干凈的容器中。用40 mL純水稀釋，混勻。將上步稀釋液通過玻璃微纖維過濾器，濾液收集于玻璃注射器筒中，量取10mL準備上柱凈化。

飼料樣品：（測定范圍0-1875 μg/kg）稱取40g磨細的樣品，5g 氯化鈉；置于250mL具塞錐形瓶中，或勻質杯中。加入100mL乙腈/水（8+2）溶液。以均質器高速勻質提取2min，或搖床震蕩60min。取下蓋子，將提取物到入槽紋濾紙上，濾液收集于干凈的容器中。移取10 mL上步的濾液，置于干凈的容器中。用40 mL pH 7.0 PBS溶液稀釋，混勻。將上步稀釋液通過玻璃微纖維過濾器，濾液收集于玻璃注射器筒中，量取10mL準備上柱凈化。

酒類：（測定范圍0-3750 μg/kg）稱取20g樣品（含二氧化碳類酒稱取前置于4℃冰箱冷藏30min，然后過濾或超聲制樣），置于50mL容量瓶中，加入乙腈定容至50mL，搖勻。移取10 mL上步的溶液，置于干凈的容器中。用40 mL純水稀釋，混勻。將上步稀釋液通過玻璃微纖維過濾器，濾液收集于玻璃注射器筒中，量取10mL準備上柱凈化。

醬油，醋，醬及醬制品：（測定范圍0-3000 μg/kg）稱取25g樣品，置于100mL容量瓶中，加入乙腈定容至100mL，超聲提取2min。將提取物到入槽紋濾紙上，濾液收集于干凈的容器中。移取10 mL上步的濾液，置于干凈的容器中。用40 mL純水稀釋，混勻。將上步稀釋液通過玻璃微纖維過濾器，濾液收集于玻璃注射器筒中，量取10mL準備上柱凈化。

2） 樣品的凈化

將上步10 mL濾液，以1滴/秒的流速全部通過玉米赤霉烯酮免疫親合柱，直至空氣進入到親合柱中。用10 mL純水以1-2滴/秒的流速淋洗親合柱2次。用1.5 mL HPLC級的甲醇以1 滴/秒的流速淋洗親合柱，將所有樣品淋洗液（1.5 mL)收集于玻璃測試管中。將1.5mL淋洗液用1.5mL純水稀釋，混勻，注入HPLC檢測；或將1.5mL淋洗液在50℃氮氣下吹干，用1mL流動相定容后，混勻，注入HPLC檢測。

高效液相色譜儀檢測玉米赤霉烯酮的標準譜圖

注意事項

1) 樣品添加回收試驗時，標準品添加到樣品中，靜置2小時后或過夜，再進行樣品前處理，否則會出現回收率偏低的現象。

2) 不要隨便更改操作說明書中的操作步驟，如需更改要和本公司技術部聯系，確認更改是否合理。

3) 操作步驟中，樣品過柱，淋洗，洗脫時，一定要控制好流速，不能太快，否則會使檢測結果偏低。

4) 如果將標準品直接過柱驗證回收率時，一定要確保標準上柱液中乙腈濃度不要超過20%，否則會影響柱子的吸附能力。

5) 試驗中使用的玻璃儀器等，一定要清洗干凈，尤其是用次氯酸等處理過的儀器，否則會使檢測結果偏低。

6) 當用氮氣濃縮洗脫液時，氮氣流不要太大，否則會損失部分玉米赤霉烯酮。

需要準備的設備及試劑