實驗方法原理
實驗材料 具有環核苷酸依賴性蛋白激酶活性的酶樣品10 mg／ml 組蛋白 2B（溶于水）
試劑、試劑盒 [γ-32P] ATP 溶液5 × 環核苷酸依賴性蛋白激酶反應緩沖液20 × 環核苷酸
儀器、耗材 30℃ 水浴
實驗步驟
1. 每個分析反應按以下比例將反應組分加入 1.5 ml 微量離心管中，保持冰浴：
5 × 環核苷酸依賴性蛋白激酶反應緩沖液
1 μl 10 mg/ml 組蛋白 2B
1 [γ-32P] ATP 溶液（ATP 終濃度為 5 μmol/L，放射活性為 5 μlCi/μl）
1 μl 20 × 環核苷酸
0～13 μl 水
蓋好離心管，混勻，放入 30℃ 水浴。
每一反應做三份并設立無底物、酶、環核苷酸等各組分的實驗對照。每個反應的體積為 20 μl。
2. 加入 1～14 μl 有環核苷酸依賴性蛋白激酶活性的預冷酶樣品，開始反應。酶的加量取決于樣品中酶活性的大小，在預試驗中所得最大反應值可衡量磷酸轉移反應的程度。
3. 30℃，溫育 10 min。
4. 按不同的分析方法加入適當的試劑停止反應：加入 20 μl 10 % 預冷的 TCA 進行 TCA 沉淀，或 10～20 μl 預冷的 2 × SDS - PAGE 樣品緩沖液進行電泳分析。
注意事項
1. 在反應中為了保持磷酸基與底物的線性結合關系可適當減小酶的加量。
2. 對于吸附在 Sepharose 珠上的免疫沉淀的酶樣品，先制備沒有酶源的反應混合物，預熱后加入免疫沉淀物。在免疫沉淀物分析時建議將容積擴大為 100 μl，可在 75 μl 反應緩沖液中加入 25 μl 吸附著免疫沉淀物的凝膠珠。