（一）染色原理
瑞氏染液是由酸性染料伊紅鈉鹽和堿性染料亞甲藍組成的復合染料溶于甲醇而成。
1﹒亞甲藍 又稱美藍（methylene blue），為四甲基硫堇染料，有色部分為亞甲藍陽離子，呈堿性。亞甲藍易被氧化為一、二、三甲基硫堇等次級染料，即天青，因此為多色性亞甲藍。
2﹒伊紅 又稱曙紅（eosin），其有色部分為伊紅陰離子，呈酸性。
3﹒亞甲藍和伊紅的水溶液混合后，形成一種溶解性低的伊紅‐亞甲藍中性沉淀物，即瑞氏染料。反應式如：M＋Cl－＋E‐Na＋→ME↓ ＋NaCl。
4﹒甲醇為有機溶劑，適量的瑞氏染料在甲醇中溶解后，解離成帶正電的亞甲藍和帶負電的伊紅離子。甲醇具有強大的脫水力，可將血細胞固定為一定形態，并能促進細胞與染料的結合。
5﹒細胞的受色 細胞的受色既有物理吸附作用，又有化學親和作用。不同細胞或細胞的不同部位化學成分不同，在某一pH
環境，各種細胞或細胞的不同部位對酸堿染料的親和力也不一樣。因此，經過染色后的同一血片上，可見到不同染色性的血細胞。Hb
和嗜酸顆粒為堿性蛋白，易與酸性伊紅結合染成紅色。核蛋白和核糖核酸為酸性成分，易與堿性亞甲藍結合染成藍色或紫紅色。中性顆粒可同時與伊紅和亞甲藍結合染成淡紫紅色。
6﹒pH 的影響 血細胞是由蛋白質組成，蛋白質是兩性電解質，所帶電荷的正負數量隨溶液pH
而定。在酸性環境中，細胞帶電荷多，易與伊紅結合而染紅色；在堿性環境中，細胞帶負電荷多，易與亞甲藍結合而染藍色。細胞受色對pH
十分敏感，因此染色時應用pH6.4～6.8 的緩沖液，使細胞染色結果一致，利于細胞的識別。
（二）試劑配制
1﹒瑞氏染液
將染料放在研缽中，加少量甲醇研磨，將已溶解的染料倒入棕色瓶中，這樣反復多次，直至染料完全溶解，甲醇用完。配好后放37℃水溶3 天，每天振搖2～3 次，1 周后使用。或室溫放置，每天振搖2～3 次，共7 天，再放1 個月后使用。
2﹒磷酸鹽緩沖液（pH6.4～6.8）
蒸餾水加至1000ml 溶解后校正pH，塞緊瓶口保存。
（三）染色方法
1﹒將已干燥的血片或髓片平放在染色架上，加染液數滴，使覆蓋整個血膜30 秒。
2﹒按1∶2～3 的比例加緩沖液混合，染色10 分鐘左右。
3﹒用緩沖液或近中性水沖去染液，自然干燥后鏡檢。
（四）結果
正常情況下，外觀呈淡紫紅色。鏡下紅細胞染粉紅色。白細胞質染天藍色或淡藍色，胞質中有特有的顆粒。核染天青紫紅色，染色質清楚，粗細松緊可辨。
（五）注意事項
1﹒血膜要干燥，否則易脫落。
2﹒室溫高，染色時間短，室溫低，染色時間長。
3﹒骨髓片染色時間要長一點，沖洗前可先用低倍鏡觀察有核細胞是否染色清楚，核質是否分明，然后再沖洗。