生命科學拉曼測試樣品制備篇—冰凍切片

　　拉曼光譜是一種無損、無標記、非接觸式的的分析檢測方法，可以為生命科學/醫學研究領域的樣品提供豐富的分子層面的信息。生命科學/醫學研究樣品有許多不同的處理和保存方法，本系列教程將介紹如何對生命科學/醫學研究樣品進行處理及不同處理方法如何進行拉曼測試準備。

　　冰凍切片

　　取材

　　取新鮮組織進行固定或直接剪切至所需大小。

　　固定步驟：

　　4%多聚甲醛（4% PFA）4 ℃固定24 h后（根據組織大小和致密程度調整固定時間）。

　　去離子水或PBS緩沖溶液清洗三次，每次10-30 min。

　　將組織從固定液中取出，在通風櫥中用手術刀將目標部位組織平整后剪切至所需大小。

　　包埋

　　在-20℃的低溫恒冷箱切片機內制備OCT凍托。

　　在OCT接近凝固時，將組織快速置入半凝的OCT中。

　　冷凍時，用長鑷子夾住底托，組織朝上，迅速浸入冷凍劑中，速凍20~30ｓ，取出或者移至-80 ℃冰箱保存。

　　切片

　　切片時將速凍組織室溫放置1 min左右，待組織升溫至-20 ℃進行切片；

　　切片時，根據組織類型對低溫恒冷箱切片機進行溫度設定：

　　脊髓、腦組織、肝組織、淋巴結等組織-10～-15 ℃；

　　甲狀腺、脾、腎、肌肉等組織-15～-20 ℃；

　　帶脂肪的組織-25 ℃左右，含大量的脂肪-30 ℃。

　　貼片

　　將切片用PBS緩沖溶液洗滌3-5次，5 min/次，以除去OCT，防止產生光譜干擾。

　　載玻片置于室溫環境，將切片平展地放置在載玻片上。

　　拉曼測試

　　冰凍切片時室溫環境中即可進行拉曼光譜及成像測量。