生物芯片樣品的準備及雜交檢測

　　目前，由于靈敏度所限，多數方法需要在標記和分析前對樣品進行適當程序的擴增，不過也有不少人試圖繞過這一問題，如 Mosaic Technologies 公司引入的固相 PCR 方法，引物 特異性強，無交叉污染并且省去了液相處理的煩瑣； Lynx Therapeutics 公司引入的大規模并行固相克隆法 (Massively parallel solid-phase cloning) ，可在一個樣品中同時對數以萬計的 DNA 片段進行克隆，且無需單獨處理和分離每個克隆。

　　顯色和分析測定方法主要為熒光法，其重復性較好，不足的是靈敏度仍較低。目前正在發展的方法有質譜法、 化學發光法、光導纖維法等。以熒光法為例，當前主要的檢測手段是激光 共聚焦顯微掃描技術，以便于對高密度探針陣列每個位點的熒光強度進行 定量分析。因為探針與樣品完全正常配對時所產生的熒光信號強度是具有單個或兩個 錯配堿基探針的 5-35 倍，所以對熒光信號強度精確測定是實現檢測 特異性的基礎 [8] 。但熒光法存在的問題是，只要標記的樣品結合到探針陣列上后就會發出陽性信號，這種結合是否為正常配對，或正常配對與錯配兼而有之，該方法本身并不能提供足夠的信息進行分辨。

　　對于以 核酸雜交為原理的檢測技術， 熒光檢測法的主要過程為：首先用 熒光素標記擴增（也可以有其

　　它放大技術）過的靶序列或樣品，然后與芯片上的大量探針進行雜交，將未雜交的分子洗去（如果用實時熒光檢測可省去此步 [9] ）這時，用 落射熒光顯微鏡或其它熒光顯微裝置對片基進行掃描，采集每點熒光強度并對其進行分析比較。前已述及，由于正常的 Watson-Crick 配對雙鏈要比具有 錯配 堿基的雙鏈分子具有較高的熱力學穩定性。所以，如果探針與樣品分子在不位點配對有差異則該位點熒光強度就會有所不同，而且熒光信號的強度還與樣品中靶分子的含量呈一定的 線性關系。當然，由于檢測原理及目的不同，樣品及數據的處理也自然有所不同，甚至由于每種方法的優缺點各異以至于分析結果不盡一致。