生物芯片法檢測解脲脲原體

   解脲脲原體是最小、最簡單的原核生物，球桿狀，直徑<150gm，細胞內有1環狀DNA分子、游離的RNA及核糖體，缺少線粒體、溶酶體和內質網等各種細胞器。近年來發現解脲脲原體引起的泌尿生殖系感染并不少見。解脲支原體寄生于患者或帶菌者的尿道和陰道黏膜，一般通過性接觸而被感染；嬰兒出生時可由產道獲得，甚少宮內感染。臨床上常采用生物芯片技術對解脲脲原體抗體進行檢測。

    [檢測方法]  生物芯片法

    [方法學原理]  以微孔濾膜為載體，利用微陣列技術將純化的解脲脲原體（Uu）I群、Ⅱ群特異性蛋白固定于同一膜片上，并利用微孑L濾膜的滲濾、濃縮、凝集作用，使抗原抗體反應在固相膜上快速進行，再以免疫膠體金作為標記物直接在膜上顯色。顯色后的芯片放人芯片識別儀，在專用軟件的支持下對不同點陣的灰度值進行分析。

    [標本準備]  取新鮮末梢血或靜脈血。如采血后24h內不能進行試驗，分離血清后將其保存于一20℃環境中。檢測時，使樣本恢復至室溫。

    [試劑]

    1．蛋白芯片

    2．試劑A（洗滌液）

    3．試劑B（金溶膠試劑）

    [儀器]  蛋白芯片檢測系統

    [檢測步驟]

    1．在芯片上標記樣品編號。

    2．在芯片盒窗口內滴加4滴試劑A，使膜表面完全浸濕。

    3．待完全滲入后，室溫環境下放置lmin，加待檢血清100~1。

    4．待血清完全滲入后，滴加6滴試劑5．待試劑B完全滲入后，滴加6滴試劑

    6．反應完畢后30min內，將芯片放人餅片閱讀系統進行分析。

    [結果判斷]

    檢測結果1：Uul群、Uu 2群均為陰性，提示沒有被感染。

    檢測結果2：Uul群陽性、Uu 2群陰性，提示被Uul群感染。

    檢測結果3：Uu 2群陽性、Uul群陰性，提示被Uu 2群感染。

    檢測結果4：Uu 1群和Uu 2群均為陽性，提示被Uu感染，并且是復合感染。

    [正常參考值]  解脲脲原體陰性

    [注意事項]

    1．從2～8℃環境取出的芯片須在室溫環境下平衡至少lOmin后方可使用。

    2．采取血樣時患者無須禁食。

    3．新鮮血樣在2—8℃環境下存放不要超過48h；長期保存的樣本應在一20℃以下環境中凍存，避免反復凍融。

    4．芯片反應窗口中的膜不能損傷或受潮。

    5．芯片應在有效期內使用。若陽性控制點不顯色說明芯片已失效，換新的芯片重做。

    6．殘余的標本與使用過的芯片盒按生物危險晶進行消毒處理。

    7．操作時要戴手套，檢測完畢徹底洗手。

    8．如不慎讓任何試劑接觸眼部，立即用大量清水沖洗。

    [臨床意義]  解脲脲原體（Uu）分為兩大群14型，第l群為1、3、6、14型，占UU感染的90％-92％；第2群為2、4、5、7、8、9、10、13型，占UU感染的8％～10％。UU不侵入組織和血液，只能黏附于泌尿生殖道的上皮細胞表面，從細胞膜獲得脂質和膽固醇，引起細胞損傷，并且解脲脲原體中的脲酶可以水解尿素產生大量的氨，對細胞有毒害作用。同時可吸附于精子表面，阻礙精子的運動。其產生的神經氨酸酶樣物質可干擾精子與卵子的結合，引起不育不孕；還可引起尿道結石；也可通過胎盤感染胎兒，引起流產、早產、死胎。