酶的固定化方法不下百種，歸納起來大致可以分為三類，即載體結合法、交聯法和包埋。
載體結合法是指將酶固定到非水溶性載體上的方法。根據固定方式的不同，這種方法又可以分為物理吸附法、離子結合法和共價結合法。物理吸附法是指將酶吸附到固體吸附劑表面的方法，固體吸附劑多為活性碳、多孔玻璃等。離子結合法是指通過離子鍵將酶結合到具有離子交換基團的非水溶性載體上的方法，載體有離子交換樹脂等。共價結合法是指酶和載體以共價鍵的形式結合在一起的方法，這種方法需要酶和載體都具有氨基、羧基或羥基等官能團。
交聯法是指通過雙功能試劑，將酶和酶聯結成網狀結構的方法。交聯法使用的交聯劑是戊二醛等水溶性化合物。
包埋法是指將酶包裹在多孔的載體中，如將酶包裹在聚丙烯酰胺凝膠等高分子凝膠中，或包裹在硝酸纖維素等半透性高分子膜中。前者包埋成格子型，后者包埋成微膠囊型。