用[32P]磷酸標記細胞實驗

HeLa 細胞

FCS 磷酸鹽

無磷酸培養基

1. 在含 10% FCS 的培養基中單層培養 HeLa 細胞至鋪滿 50% 左右。

2. 倒掉完全培養基，加入新鮮的無磷酸培養基，培養 3~4 小時以耗盡胞內的磷酸儲備。

3. 換新鮮的無磷酸培養基，并加 ³²P 磷酸鹽至 20 μCi/ml，繼續培養 16 小時。

4. 估算同位素的攝取量：

(1) 加入同位素，混勻后立即吸出 5 μl 培養基于一小離心管，冰浴。

(2) 培養結束后再取 5 μl 培養基。

(3) 通過測定溫育前后培養基活性差來估算放射活性。

5. 提取并分析 RNA。