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  • 發布時間:2019-04-04 10:54 原文鏈接: 用[32P]磷酸標記細胞實驗_標記單層培養細胞

    實驗材料

    HeLa 細胞

    試劑、試劑盒

    FCS磷酸鹽

    儀器、耗材

    無磷酸培養基

    實驗步驟

    1. 在含 10% FCS 的培養基中單層培養 HeLa 細胞至鋪滿 50% 左右。

    2. 倒掉完全培養基,加入新鮮的無磷酸培養基,培養 3~4 小時以耗盡胞內的磷酸儲備。

    3. 換新鮮的無磷酸培養基,并加 32P 磷酸鹽至 20 μCi/ml,繼續培養 16 小時。

    4. 估算同位素的攝取量:

    (1) 加入同位素,混勻后立即吸出 5 μl 培養基于一小離心管,冰浴。

    (2) 培養結束后再取 5 μl 培養基。

    (3) 通過測定溫育前后培養基活性差來估算放射活性。

    5. 提取并分析 RNA。

    展開


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