用于檢測和定量分析極性細胞代謝物的一種新穎...（四）

發布時間：2020-07-06 23:36 原文鏈接：用于檢測和定量分析極性細胞代謝物的一種新穎...（四）

圖6. 使用堿性（左表）和酸性（右表）流動相在H-S和H-G組織樣本中所檢出化合物的濃度計算結果總合

對在堿性和酸性流動相分離中所檢出的H-S和H-G組織樣本中的每種化合物均計算了分析物濃度。通過比較紅色比目魚肌（S）和腓腸肌（G）組織樣本中的代謝物濃度證實了在其相對濃度方面存在顯著差異。

3. 通過聯用Synapt G2的UPLC對HILIC LC-MS方法的標準品和細胞萃取物進行定量分析

最近開發的用于Synapt G2的QuanTof技術^[1]以及MS^E數據采集技術的應用實現了一種通用型UPLC-MS方法的開發；這種方法可在一次運行分析得到提供所有物質的定量和定性信息，既包括母離子信息也包括產物離子的信息。對于此項測定而言，系列稀釋標準品以及H-S和H-G樣本的數據都進行了采集（圖7），所有的數據處理工作在采集完成后進行。

圖7. 全掃描色譜圖比較。通過UPLC-Synapt G2獲取的S和G細胞萃取物的數據。

圖8. 目標化合物的鑒定和定量結果

首先，自動篩選細胞萃取物中是否存在目標化合物。離子的鑒定和確認通過一個單一處理步驟使用Posit±veTM軟件包得出母離子和子離子的準確質量（2mDa窗口）而實現（圖8）。

該數據表明與Xevo TQ分析結果具有良好的一致性。圖8給出了一個示例，化合物L-脯氨酸在細胞萃取物中被明確鑒別出來，并在4個數量級中表現出線性的動態范圍響應，RMS質量誤差為0.57mDa。

結論

使用新型BEH Amide酰胺柱可開發出一種用于分離極性組織細胞代謝物的HILIC LC-MS方法，總運行時間不到15分鐘。

同時采用Xevo TQ和Synapt G2 HDMS對紅色和白色的肌肉組織萃取物進行定量分析，可明顯區分出其主要代謝物（比如AMP、ADP和ATP、以及瓜氨酸）的顯著不同。

QuanTof技術實現了定性和定量試驗能夠在Synapt G2上同時進行。

參考文獻

1. Wildgoose J．整合了基于ADC新穎檢測技術的高效、幾何折疊型OA-Tof 質量分析儀．第18屆國際質譜大會（IMSC）所提交的公告，德國不來梅，2009年。

化合物	濃度（ng/mL）
H-S （0089）	H-S （0090）	H-G （0097）	H-G （0098）
甘氨酸	4150	4250	3130	3350
L-丙氨酸	4520	5560	3050	3290
L-精氨酸	1800	1750	50.1	48.6
L-天冬氨酸	1970	1300	125	46.4
L-胱氨酸	5.3	4.4	0	0
L-谷氨酸	8680	4790	1330	1270
L-組氨酸	412	455	110	123
L-賴氨酸	2910	2890	0	0
L-甲硫氨酸	261	295	201	213
L-苯丙氨酸	361	400	159	178
L-脯氨酸	302	281	278	264
L-絲氨酸	1300	1280	410	483
L-蘇氨酸	358	398	171	179
L-酪氨酸	269	363	173	189
L-纈氨酸	531	524	508	503
亮氨酸	219	214	122	119
異亮氨酸	818	820	302	332
谷胱甘肽（還原態）	5.2	3.8	250	1090
谷胱甘肽（氧化態）	541	539	539	544
鳥氨酸	591	839	0	0
瓜氨酸	148	163	105	131
β-羥基丁酸	280	501	485	558
反丁烯二酸	576	1220	0	0
乳酸	8830	17100	6920	14900
丙酮酸	19.7	39.2	36.6	72.4
琥珀酸	931	1720	787	1410
5-磷酸核糖	27.1	19.9	0	0
5-磷酸木酮糖	50.7	51.5	0	0

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