結果和討論
不使用鹵代溶劑做流動相的普通高效液相色譜法很難分離植物油的主要組分——甘油三酸酯。圖12為普通高效液相色譜法(2根5μm粒徑顆粒填充的150mm長的C18柱，蒸發光散射檢測器ELSD)得到的大豆油的典型色譜圖，使用乙腈和二氯甲烷作為流動相，實現該分離需要60多分鐘。由于二氯甲烷在240nm以內具有紫外吸收，這會干擾甘油三酸酯的紫外吸收(最大波長吸收值約210nm)，因此使用蒸發光散射檢測器(ELSD)進行檢測。
ACQUITY UPLC系統的設計特點是使用小顆粒裝填技術的高效色譜柱，以進行更快速、更靈敏和更高分離度的分離。UPLC的溶劑傳送系統能承受高達15,000 psi的背壓，因此能夠使用2-丙醇等高黏度溶劑進行植物油分析。由于2-丙醇對植物油的溶解性好12、低毒，透射度限制低，便于對甘油三酸酯進行紫外檢測，因此2-丙醇被選作強洗脫液。圖13為關于同一大豆油樣品的10張疊加的紫外色譜圖說明UPLC法的重現性，此分離使用1.7μm粒徑的2.1 x 150mm的 BEH C18色譜柱，乙腈/2-丙醇作為流動相，整個運行時間縮短為22分鐘。圖12和圖13比較，具有相似的甘油三酸酯峰型，但UPLC法具有更高的分離度，更短的運行時間。數據表明不使用致癌溶劑作為流動相，使用 UPLC分離植物油中的組分具有明顯優勢。用于植物油分析的乙腈/2-丙醇流動相的UPLC系統可使用PDA、ELSD和MS檢測器，不像其他用于普通高效液相色譜法的溶劑。一次進樣便可得到多種數據類型，并可以產生可重現的指紋圖譜數據7，通過質譜法鑒別甘油三酸酯組分10，并用PDA多波長掃描測定植物油的氧化程度8。目前已知植物油具有特征的甘油三酸酯比，這對植物油指紋圖譜5-8的鑒別很有用。如圖14-16所示，核桃油、葡萄籽油、芝麻油、特級天然橄欖油A、特級天然橄欖油B、榛子油、茶籽油、玉米油、加拿大低酸油、高油酸葵花籽油和普通葵花籽油的紫外色譜圖證實，每種油樣品都具有獨特的色譜類型，即相對峰強度。
為了高效使用峰強度比進行品牌質控和質量鑒定，Empower 2軟件的自定義字段計算功能可根據用戶設定的質控標準自動將原始色譜數據轉換為合格或不合格報告。以特級天然橄欖油A為例說明該改進的方法。圖17為特級天然橄欖油A的疊加紫外色譜圖和峰面積。甘油三酸酯的峰面積從最強峰(OOL)到最弱峰(LLL)其RSD值(n=6)<0.9%。共有20多個可見峰，任一峰都能被用作標記峰或指示峰，用以計算峰面積比。為了便于討論，將之前確定的甘油三酸酯的峰OOO、OOL、LLO和LLL選作指示峰10，將僅出現在橄欖油產品中、通過紫外檢測觀察到的保留時間為9.8分鐘的強峰選作標記峰13。由于大多數廉價的蔬菜油和降解油具有很多保留時間低于13.6分鐘的其它強峰9，因此可用定時組功能(圖7)創建雜質指示峰，以監測是否存在污染。該雜質指示峰是指標記峰之外的保留時間介于3-13.6分鐘的所有峰的總和。通過創建自定建自定義字段“Ratio_IS”(圖4)，可用Empower 2軟件自動計算峰面積比(指示峰面積除以標記峰面積)。表1總結了峰面積比的結果以及STDEV值。“峰面積比±3xST-DEV”被用作每個指示峰的質控標準。由于地理和其它種植條件的差異，植物油的某一特定類型會存在差異。該數值在比較其它植物油樣品是否符合基于特定油品的質控標準方面具有極大的價值。