用于PCR的模板DNA制備實驗

1. 10 mm 厚石蠟切片 10～15 張，置入消毒后的 1.5 ml Eppendorf 管中。

2. 脫蠟 二甲苯 1200 μl，9000 r/min，8 min×3。

3. 脫水無水乙醇 1200 μl，9000 r/min，5 min×3。

4. 打開 Eppendorf 管蓋子，將其置于 37℃ 烤箱中干燥 1～2 h。

5. 加裂解液 100μl，混勻后加 20 mg/ml 蛋白酶 K 15～20 μl，終濃度 10 μg/ml 間隔振蕩，55℃ 烤箱中過夜。

裂解液配制：1 mol/L Tris-HCl（pH 8.0）2 μl，0.5 mol/L（pH 8.0）EDTA 4 μl，10％ SDS（pH 7.2）20 μl，加水至 100 μl。

6. 觀察裂解液是否清亮，如不清亮，根據組織量補加蛋白酶 K 3～5 μl，繼續消化至裂解液清亮。

7. 加 500 μl Tris 飽和酚，混合至乳狀。

8. 10000 r/min 離心 10 min，小心吸取上清液。

9. 加酚和氯仿各 250 μl，混勻，10000 r/min 離心 5 min，小心吸取上清液。

10. 加氯仿 500 μl，混勻，10000 r/min 離心 5 min，取上清液。

11. 加 NaAc（乙酸鈉，3mol/L，pH 6.0）70 μl，無水乙醇 700μl，混勻，-20℃ 保存 2 h。

12. 10000 r/min 離心 5 min，棄上清液。

13. 加 70％ 乙醇 1 ml，混勻，清洗。

14. 10000 r/min 離心 3 min，棄上清液。

15. 開蓋，倒置 Eppendorf 管，室溫下干燥。

16. 加 TE 緩沖液（pH 8.0）20～40 μl，55℃，10 min 速溶，置于 -20℃ 冰箱中保存。