用于HPLC分析的超純水——超純水之角色

      糖分析是HPLC的典型應用之一,它廣泛的應用在許多測試中用以確定膜的性能，一方面可以通過糖分析來確定膜去除糖分子的能力，另一方面也可檢測膜固定化酶的活性。在分析中，目前通常采用薄層色譜法（TLC）、氣體色譜法（GC）以及液相色譜法（HPLC）進行糖分析。尤其是當混合物中包含幾種必須要分離的糖分類型時，更加需要使用這些方法。 

    本文所描述的HPLC，洗脫液必須具有極高的物理和化學純度，并且不得含有懸浮機械性顆粒或任何在保留時間內由流穿色譜柱的溶解物質，因為這些溶解物質會產生干擾信號。溶劑的質量往往對HPLC分析的可靠性起到決定作用。去離子水或蒸餾水仍然含有微量的可產生鬼峰的有機物質[5]溶劑中的污染物會在固定相上不斷累積，進而導致色譜柱的堵塞，樣品運行期間壓力的上升和漂移可以證明這一點。

使用arium? pro VF純化水作為洗脫液

     HPLC所需的特殊品質的水可以從多家生產商處購買，也可以使用一個水純化系統在現場直接生產，比如arium? pro VF系統。下面描述的是分離糖混合物的實驗，其中的流動相（洗脫）使用的是由arium? pro VF生產的超純水。

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材料和方法

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結果

1. 各種糖經 HPLC色譜柱后的分離結果。黑色曲線：糖混合物 在確定好每一種糖之后，便開始制備并分離糖混合物（圖5）。

圖5: 單一注射的糖樣品的分離結果以及糖混合物用超純水經交聯8 % Na+的Rezex RNM

2. 通過注射磷酸鉀緩沖液和自來水來模擬污染物的效應或鹽的影響（圖6）。

注射的自來水電導率為265μS/cm，磷酸鉀緩沖液的電導率為1700μS/cm，兩者都顯示了清晰的信號，因而可以明顯地辨別為污染物。在本次分析中使用的arium?超純水的電導率為0.055μS/cm，基本不含干擾性雜質，表現為波形平坦，沒有波峰產生（見圖6中的綠色基線）。

圖6：2μl的10mM磷酸鉀緩沖液，2μl的自來水以及2μl的arium? pro VF超純水的色譜圖。

分析運行過程中的柱壓恒定地維持在23bar(~ 334psi)。這表明了在色譜柱內沒有沉積物累積。開始和結尾的空白運行未顯示出任何改變；亦即，在流動相中沒有污染物。

對不同濃度的標準系列進行分析，以確定重現性和檢測限值。以棉子糖作為這些分析的例子。保留時間和峰面積均被記錄并在表4中列出。

不斷重復獲得一致的保留時間說明了具有優異的重現性。棉子糖標準系列顯示了一條濃度高達0.015mg/ml的線性曲線（圖7）。

圖7：棉子糖和arium? pro VF超純水通過Rezex RNM Carbohydrate Na+ 8%色譜柱的標準系列（數值來自表4）。

根據量化樣本的峰面積生成一條標準的直線，對棉子糖研究是完全可行的。

結論

     本文的研究結果顯示由arium? pro VF生產的超純水可以即時用作上文所列水溶性糖的HPLC分析的流動相，也可用于食品分析，環境分析，制藥、化學和生物化學方面的研究，以及制藥和生物行業的工藝中質量控制測試。arium? pro VF超純水在HPLC色譜法中作為流動相所開展的研究以及所獲得的經驗，都使其可在不久的將來延伸用于其它分離技術，比如反相色譜，尺寸排阻色譜或超液相色譜技術等。