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  • 發布時間:2019-09-11 11:10 原文鏈接: 用農藥檢測儀器測定小分子的農獸藥殘留

    我們知道盡管早期的農藥檢測儀器由于特異性不夠高而妨礙了其在實際中應用的步伐,但隨著方法的不斷改進、材料的不斷更新,檢測的效果越來越好,酶進行高效催化作用,逐漸具有檢測靈敏度高、特異性強、準確性較好等特點,而且可與其他技術偶聯而衍生出適用范圍更廣的新方法。根據試劑的來源和標本的性狀以及檢測的具備條件,可設計出各種不同類型的檢測方法,如競爭法、間接法、雙抗體夾心法、雙位點一步法等。目前用于農獸藥殘留檢測試劑盒的ELISA方法主要為競爭法和間接法。此方法儀器化程度低、操作簡便,特別是對樣本前處理要求簡單,易于推廣,所以此方法成為優先發展的分析技術之一。


    農藥檢測儀器基本原理:就是利用ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表而的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應的結果,使測定方法達到很高的敏感度。


    抗原抗體反應指抗原與相應抗體之間所發生的特異性結合反應,抗體能特異性地識別相應的抗原,并與之結合。這種反應即可在機體內進行,也可以在機體外進行,這種特性就是許多免疫檢測方法的基礎。抗原的特異性取決于抗原決定簇的數目、性質和空間構型,而抗體的特異性則取決于抗體時間段的可變區與相應抗原決定簇的結合能力。因為抗體分子的結構特點,以及抗原分子結構的多樣性,使抗原抗體結合反應表現出復雜性。抗原抗體反應的過程是經過一系列的化學和物理變化,包括抗原抗體特異性結合和非特異性促凝聚兩個階段,及由親水膠體轉為疏水膠體的變化。抗原抗體反應的特點主要有三性:即特異性、比例性、可逆性。抗原與抗體不是通過共價鍵,而是通過很弱的短矩引力而結合,如范德華引力、靜電引力、氫鍵及疏水性作用等。ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。在這種測定方法中有三個必要的試劑:固相的抗菌素原或抗體,即“免疫吸附劑”(如圖5-1)

    七種磺胺類藥物的ELISA標準曲線

    C2)酶標記的抗原或抗體,稱為”結合物”;酶反應的底物。測小分子的農獸藥殘留,一般用以下幾種方法:


    間接競爭法:用抗原包被固相載體后,同時加入特異性抗體和待測物,使固相抗與樣品中的待測物競爭性地結合抗體,去除固相和液相后加入酶標二抗,最后加入酶反應底物,根據其顯色程度判定其樣品中的待測物含量。


    直接競爭法:將特異性抗體包被固相載體,待測藥物與己知量的酶標抗原混合后加入。待測藥物和酶標抗原,具有相同抗原決定簇,它們競爭性地結合固相抗體。分離游離的和結合的酶標抗原,最后加入酶反應底物,根據顯色程度判定待測藥物的含量。


    間接夾心法:將樣品中的抗原結合于過量的固相抗體,溫育洗滌加入過量的同種抗體(第一抗體),再溫育洗滌后加入酶標二抗,最后加入底物反應,據顯色程度確定待測抗原的含量。


    雙抗體夾心法:抗體包被固相載體,加入待測抗原使其與過量的固相抗體結合,溫育洗滌后再加入過量的酶標抗體,分離固相和游離相的化合物,加入反應底物,據顯色程度來判定樣品中抗原的含量。


    目前廣泛使用的各種農獸藥殘留實驗室酶聯免疫快速檢測技術和快速檢測試劑盒基本上都是定量檢測,而試紙條技術屬于定性檢測技術。試紙條與試劑盒相比較具有更加易于攜帶、檢測更加迅速等優勢。在實際檢測過程中,特別是現場快速檢測,并不一定需要對每個樣品都獲得定量數據而只需要定性地判別出某個樣品是否含有某種農獸藥,含量是否超過規定標準既可。因此只需要幾分鐘或十幾分鐘就可以獲得結果的農藥檢測儀器是最為合適的檢測工具。


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