可通過小量液體培養物制備高滴度 λ 噬菌體原種。這一方法最早由 Leder 等（1977）采用。一般來說，它所得到的 λ 噬菌體的產量比平板裂解低且不穩定，另外噬菌體最初的接種量也大。但是，在液體培養物中制備的 λ 噬菌體原種將更清亮，并且也不含污染平板裂解物的硫酸鹽多糖。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。
| 實驗方法原理 | 可通過小量液體培養物制備高滴度 λ 噬菌體原種。這一方法最早由 Leder 等（1977）采用。一般來說，它所得到的 λ 噬菌體的產量比平板裂解低且不穩定，另外噬菌體最初的接種量也大。但是，在液體培養物中制備的 λ 噬菌體原種將更清亮，并且也不含污染平板裂解物的硫酸鹽多糖。 |
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| 實驗材料 | λ 噬菌體原種 |
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| 試劑、試劑盒 | 氯仿SM |
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| 儀器、耗材 | LB 或 NZCYM 瓊脂平板Sorvall SS-34 或相當型號30℃培養箱聚丙烯培養管 |
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| 實驗步驟 | 一、材料
1. 緩沖液和溶液
氯仿，SM。
2. 培養基
預熱至 37℃ 的 LB 或 NZCYM 培養基
3. 離心機和轉子
Sorvall SS-34 或相當型號。
4. 專用設備
30℃ 培養箱
聚丙烯培養管（17 mm X 100 mm）
5. 載體和菌株
λ 噬菌體原種
二、方法
1. 接種大腸桿菌適宜菌株的單菌落至 5 ml NZCYM 或 LB 培養基中，30℃ 劇烈振蕩培養過夜。
2. 轉接 0.1 ml 新鮮的細菌過夜培養物（步驟 1 制備）至一無菌的 17X100 mm 聚丙烯培養管中，該管帶有一松扣的蓋，然后加入 50~100 μl 約含 106 pfu λ 噬菌體的 SM 進行感染。
3. 將感染培養物于 37℃ 放置 20 min，使噬菌體顆粒吸附至細菌上。
4. 加入 4 ml 預熱的 NZCYM 或 LB 培養基，劇烈振蕩培養直到裂解發生（通常 37℃ 培養 8~12 h)。
如果培養 12 h 后，裂解還沒有發生或不完全，則在培養物中加入等體積的預熱 NZCYM 或 LB 培養基，37℃ 繼續劇烈振蕩培養 2~3 h。
5. 裂解發生后，加入兩滴（約 100 μl）氯仿，37℃ 繼續培養 15 min。
6. 4℃ 4000 g ( 5800 r/min Sorvall SS-34 轉子）離心 10 min。
7. 回收上清，加 1 滴（約 50 μl ) 氯仿，將病毒原種進行保存。 |
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