|
一、材料
1. 緩沖液和溶液
氯仿,SM。
2. 培養基
預熱至 37℃ 的 LB 或 NZCYM 培養基
3. 離心機和轉子
Sorvall SS-34 或相當型號。
4. 專用設備
30℃ 培養箱
聚丙烯培養管(17 mm X 100 mm)
5. 載體和菌株
λ 噬菌體原種
二、方法
1. 接種大腸桿菌適宜菌株的單菌落至 5 ml NZCYM 或 LB 培養基中,30℃ 劇烈振蕩培養過夜。
2. 轉接 0.1 ml 新鮮的細菌過夜培養物(步驟 1 制備)至一無菌的 17X100 mm 聚丙烯培養管中,該管帶有一松扣的蓋,然后加入 50~100 μl 約含 106 pfu λ 噬菌體的 SM 進行感染。
3. 將感染培養物于 37℃ 放置 20 min,使噬菌體顆粒吸附至細菌上。
4. 加入 4 ml 預熱的 NZCYM 或 LB 培養基,劇烈振蕩培養直到裂解發生(通常 37℃ 培養 8~12 h)。
如果培養 12 h 后,裂解還沒有發生或不完全,則在培養物中加入等體積的預熱 NZCYM 或 LB 培養基,37℃ 繼續劇烈振蕩培養 2~3 h。
5. 裂解發生后,加入兩滴(約 100 μl)氯仿,37℃ 繼續培養 15 min。
6. 4℃ 4000 g ( 5800 r/min Sorvall SS-34 轉子)離心 10 min。
7. 回收上清,加 1 滴(約 50 μl ) 氯仿,將病毒原種進行保存。
展開 |