用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析實驗—依賴環核苷酸

激酶分析緩沖液組蛋白 2B 儲存液環核苷酸依賴的蛋白質激酶分析緩沖液環核苷酸儲存液

1. 在置于冰上的離心管內配制含下列成分的 20 μl 反應混合物：

5X 激酶分析緩沖液 4 μl，10 mg/ml 組蛋白 2B 儲存液 1 μl，[γ-³²P] ATP（終濃度為 5 μCi/5 μmol/L ATP） 1 μl，水（取決于下一步所加的激酶樣品的量） 0~14 μl

10X 環核苷酸依賴的蛋白質激酶分析緩沖液

20X 環核苷酸儲存液

2. 往上述反應混合物中加 1~14 μl 激酶樣品，開始反應。

3. 于 30℃ 反應一定時間（先做預實驗，從 10 分鐘時起，最好選線性反應期的某個時間點）。

4. 制備樣品進行 TCA 沉淀分析、SDS-PAGE 或者用 P81 磷酸纖維素濾紙分離標記的組蛋白。