1. 準備如下的重組混合液: 約 8 ug 未標記的超聲破碎的牛胸腺 DNA (作為載體 DNA; 加自 1~2 mg/ml 儲液) 200 000~400 000 cpm 單獨標記的 DNA 6.4 ug (組蛋白:DNA 為 0.8:1) 或 0.8 ug(組蛋白:DNA 為 1:1) 純化的天然核心組蛋白(H2A/H2B 和 H3/H4) 160 ul 5 mol/L NaCl (終濃度 2.0 mol/L) TE 緩沖液,pH 8.0,至 400 ul。
2. 室溫 30 min。
3. 將重組混合液加入 6000~8000 MWCO 透析袋中。
4. 在 1 L 含有 1~2 mol/L NaCl 的 TE 緩沖液,pH 8.0 中透析重組混合物,4℃ 透析 2 h。
5. 重組混合液連續在以下新鮮配置的透析緩沖液中進行透析,每次 4℃ 透析 2 h: TE 緩沖液,pH 8.0, 含有 1.0 mol/L NaCl TE 緩沖液,pH 8.0,含有 0.8 mol/L NaCl TE 緩沖液,pH 8.0,含有 0.6 mol/L NaCl
6. 在不含 NaCl 的 TE 緩沖液,pH 8.0 中透析重組混合物,4℃ 過夜。
7. 電泳檢測核小體的完整性。
8. 在 10%~30% 甘油梯度上從裸露的 DNA 上純化組裝好的核小體核心,100 000 g 離心 18.5 h。 展開 |