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  • 發布時間:2019-04-11 15:37 原文鏈接: 用逐步鹽透析的方法組裝核小體模板實驗

    實驗材料

    牛胸腺 DNA放射性標記的 DNA純化的天然核心組蛋白

    試劑、試劑盒

    NaClTE 緩沖液

    儀器、耗材

    MWCO 透析管

    實驗步驟

    1. 準備如下的重組混合液:

    約 8 ug 未標記的超聲破碎的牛胸腺 DNA (作為載體 DNA; 加自 1~2 mg/ml 儲液)

    200 000~400 000 cpm 單獨標記的 DNA

    6.4 ug (組蛋白:DNA 為 0.8:1) 或 0.8 ug(組蛋白:DNA 為 1:1) 純化的天然核心組蛋白(H2A/H2B 和 H3/H4)

    160 ul 5 mol/L NaCl (終濃度 2.0 mol/L)

    TE 緩沖液,pH 8.0,至 400 ul。


    2. 室溫 30 min。


    3. 將重組混合液加入 6000~8000 MWCO 透析袋中。


    4. 在 1 L 含有 1~2 mol/L NaCl 的 TE 緩沖液,pH 8.0 中透析重組混合物,4℃ 透析 2 h。


    5. 重組混合液連續在以下新鮮配置的透析緩沖液中進行透析,每次 4℃ 透析 2 h:

    TE 緩沖液,pH 8.0, 含有 1.0 mol/L NaCl

    TE 緩沖液,pH 8.0,含有 0.8 mol/L NaCl

    TE 緩沖液,pH 8.0,含有 0.6 mol/L NaCl


    6. 在不含 NaCl 的 TE 緩沖液,pH 8.0 中透析重組混合物,4℃ 過夜。


    7. 電泳檢測核小體的完整性。


    8. 在 10%~30% 甘油梯度上從裸露的 DNA 上純化組裝好的核小體核心,100 000 g 離心 18.5 h。

    展開


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