實驗方法原理
實驗材料 含蛋白質的樣品
試劑、試劑盒 100%三氯醋酸(TCA)0.1N NaOH(400 mg NaOH 溶于 100 ml 蒸餾水)
實驗步驟
1. 在 1ml 樣品中至少要含有 5mg 蛋白質。加 100 ul 100% 的三氯醋酸(TCA),混勻;
2. 將蛋白質在冰浴中沉淀 30 min (或在冷凍箱內放置 15 min );
3. 10 000 ×g 離心 5 min;
4. 棄去上清并用吸管吸凈殘留液;
5. 將沉淀再懸浮于50~100% 0.1N NaOH 溶液,混勻。
注意事項
1. 用 TCA 沉淀蛋白質,所需最低的蛋白質濃度是 5 ug/ml。
2. 有時需要用 10% TCA 或乙醇-乙醚(1:1)洗滌 TCA 沉淀的蛋白質,以除去 TCA。
3. 第 5 步不用 NaOH 溶液再懸浮 TCA 沉淀,而是用乙醇-乙醚(1:1 )洗滌 TCA 沉淀 ,并用緩沖液再懸浮沉淀,可能更易操作。
4. 脫氧膽酸鹽三氯醋酸(DOC-TCA)沉淀法是 TCA 沉淀法的一種變通形式,它可用于濃度 為 1 ug/ml 以下的蛋白質濃縮,該法使用范圍更廣。
1 ml 樣品加 0.1 ml 0.15% DOC。
混勻并在室溫下放置 10 min。
加 50 ul 100% TCA,混勻并在 10 000×g 離心 5 min。
DOC-TCA 沉淀反應不能在 SDS 存在的條件下進行。