用非同位素探針進行原位雜交和檢測實驗——雜交信號放大

載有樣本的載玻片

1?3μg ml生物素酰化抗親和素抗體 溶于4×SSC 1% (m V) BSA (組分 V)生物素信號放大溶液：含2?5μg ml熒光素親和素DCS 溶于 4×SSC 1% (m V) BSA (組分V)

廣口瓶載玻片濕盒

1) 用生物素酰化探針與切片進行雜交、洗滌，進行第一輪雜交信號檢測。

對生物素酰化探針信號的放大，可在基本方案步驟8之后的任何一步進行。

2) 如果切片已加蓋玻片并密封，可用一針頭或解剖刀片劃開密封的指甲油，移去蓋玻片，并除去載玻片上指甲油。將玻片浸于盛有 0.1% Triton ×-100/4×SSC的，以鋁箔包裹的Coplin廣口瓶15 min,輕輕搖動。如蓋玻片不易松動，應小心抬起，重復洗滌2次。

3) 吸去載玻片上殘余溶液，在載玻片上加 50μL的1?3μg/ml生物素酰化抗親和素抗體，蓋以22 mm²大小的Parafilm 膜，置加濕盒中，濕盒外裹以鋁箔，放 37℃溫育 30 min。

4) 取掉Parafilm 膜，在 0.1% Triton ×-100/4 × SSC中輕搖洗滌15 min。

5) 吸去玻片上殘液，加50μL生物素信號放大溶液，蓋以Parafilm膜。放在裹以鋁箔的加濕盒中，于37℃溫育30 min。

6) 移去Parafilm 膜，并以 0.1% Triton×-100/4×SSC 洗滌 15 min。然后以 4×SSC洗滌15 min,洗滌時應輕輕搖動。可進行親和素-熒光素和生物素酰化抗親和素抗體的多層反應，但將會明顯地增加本底。

7) 復染，固定并在顯微鏡下觀察