實驗方法原理 配制全成分培養基時,準備好幾個盛有無菌去離子蒸餾水的容器,一個容器的容量至少要夠用1~3 周。加濃縮培養基和其他成分,調整pH , 直接使用或放回冰箱。
用于密封的培養瓶,含空氣、低濃度 HCO3— 、大氣 CO2 濃度和低緩沖力。
實驗材料 UPW培養基10×濃縮液谷氨酰胺牛血清抗生素青霉素鏈霉素HEPES
試劑、試劑盒 NaOH
實驗步驟
1. 將血清和谷氨酰胺解凍,置于超凈工作臺內。
2. 所有曾放入水浴鍋的瓶子都要擦干凈后再放入超凈臺。
3. 加人上述“無菌溶液”所列成分,加 HEPES 可能會增加緩沖能力,對于某些細胞系,在高細胞密度情況下如果產生很多酸性物質,培養瓶可使其排出。
4. 加人 1 mol/L NaOH ,使 pH 達到 7.2 (20°C ) , 孵育之后培養基的 pH 將上升至 7.4 (37°C ),但如果是第 1 次使用的配方,這個數值可能還需要通過滴定試驗來檢驗。
注意事項
如果需要加人其他成分,而這些成分是用水配制的,,則加入前應先從已準備好的水中取出相同體積的水;如果這些成分溶解在等滲鹽溶液中,則只要加入至終體積。因為血清是等滲的,所以血清也是加人至終體積,盡管這樣做會稀釋培養基的營養成分。
在37°C 時要不斷地平衡和檢測pH , 隨著溫度的升高,CO2 的溶解度會降低,HEPES 的 pKa 也會發生變化。