在圖4中,顯示了UPLC HDMSE實驗生成的常規MS譜圖。在m/z 157和m/z 166處,清楚顯示環丙沙星存在兩個小的雙電荷離子,表明環丙沙星確實形成了一種雙電荷物質。使用離子淌度能夠實現分離并確認該小分子形成了雙電荷物質。雙電荷物質的形成與否,取決于使用的MS參數,尤其是錐孔電壓。如果錐孔電壓過高,則無法觀察到雙電荷物質,僅能觀察到[M+H]+。
所得數據表明:應當仔細考慮方法開發和所選的分析方法,因為促進劑的比例和形成會根據洗脫液流速、毛細管電壓、錐孔電壓和基質的不同而發生變化。如果選擇了MRM方法,則需要考慮使用的實驗條件和所選擇的具體質譜通道。實驗數據表明:選擇的MRM離子對如果不一致,容易在實驗室內和不同實驗室間產生偏差,闡述了保持這些化合物可重現性結果,遇到的挑戰。離子淌度是一種可用于方法開發的強大工具,能夠確保方法的可靠性并獲得一致結果。
除了更加具體和可靠的方法開發,不同組分的不同漂移時間,可作為另一個鑒別條件。本應用紀要介紹了可用作環丙沙星鑒定條件的保留時間、母離子精確質量數、碎片離子精確質量數和兩個漂移時間。
除了利用離子淌度獲得一個新的鑒定條件,還可將離子淌度產生的正交分離用于譜圖清理。漂移時間與保留時間變化圖(圖8A)顯示了離子強度,用白色像素表示。基質離子的存在范圍用連續的白色表示。更大強度的分析物和基質組分由更明顯的白點表示。但是由于基質產生了大量的離子強度,所以很難觀察到低濃度的目標分析物。在圖8B中,從豬基質中提取出了環丙沙星促進劑。根據使用離子淌度所得到的清晰、選擇性的分離,可產生單一組分的MS及其碎片離子譜圖。在這些條件下,豬基質中的酸性位點促進劑與堿性位點促進劑的比例測定為5:1。這受到了毛細管電壓、錐孔電壓、電極位置、流速和基質的影響。在注射實驗中,可以改變酸/堿促進劑的比例,甚至可改變含量最高的促進劑。
圖9和10顯示了環丙沙星、諾氟沙星和二氟沙星促進劑的到達時間分布以及分別使用氮氣和二氧化碳作為緩沖氣體時得到的峰間分離度計算結果。雖然兩種氣體都獲得了可接受的分離度,但是峰間的Rs值大于1.5才可視為完全分離。先前的研究認為:交替使用這兩種緩沖氣體,可增加離子淌度的分離度10-14。