用UPLC／MS／MS和UPLC／PDA進行三聚氰胺、三聚氰酸二酰...（二）

UPLC 的條件

液相色譜系統： 沃特世 ACQUITY UPLC
色譜柱： ACQUITY UPLC BEH HILIC
2.1 x 100 mm 、 1.7 μm
柱溫： 35 ℃
流速： 700 μL/ 分鐘
流動相： 溶于 90/10 乙腈／水的 10 mM 醋酸銨
進樣量： 5 μL
ACQUITY PDA ： 200 -300 nm

質譜條件

質譜系統： 沃特世 ACQUITY TQD
軟件： 沃特世 MassLynx? 第 4.1 版
電離模式： ESI 正離子（三聚氰胺和三聚氰酸二酰胺）
ESI 負離子（三聚氰酸）
毛細管電壓： 3 kV
脫溶劑氣： 氮氣， 900 L ／小時
錐孔氣： 氮氣， 50 L ／小時
源溫度： 150 ?C
脫溶劑氣溫度： 400 ?C
采集： 多反應監測（ MRM ）
碰撞氣： 氬氣， 3.5 x 10 -3 毫巴

對每種化合物采集兩種多反應監測（ MRM ）的躍遷數據。主要躍遷用于定量分析，次要躍遷用于確認。 MRM 的躍遷、停頓時間、優化后的碰撞能量以及錐孔電壓見表 1 。

表 1. 受監測的 MS/MS 離子躍遷（ ESI 正離子），三聚氰胺、三聚氰酸二酰胺；（ ESI 負離子）三聚氰酸

第 1 部分： UPLC /MS/MS 分析

ACQUITY UPLC-TQD 臺頂式串聯四極桿質譜儀可用不到 1.5 分鐘的時間完成對三聚氰胺和三聚氰酸二酰胺的分離和確認。參見圖 3 。 ACQUITY UPLC BEH HILIC 色譜柱可給出清晰的峰形，從而可對寵物食品和面筋型樣品進行可信的定量分析。為實現準確定量，組織樣品的分析通常需要使用一種同位素標記型內標。本文未對組織樣品的分析進行說明，這是因為目前沒有適用于這些化合物的同位素標記型內標。

三聚氰酸在另一次檢測中進行分析，所用的色譜條件與三聚氰胺和三聚氰酸二酰胺的分析條件相同。圖 4 給出了氰尿酸的一幅 UPLC/MS/MS 色譜圖。

圖 5 給出了萃取得到的一種三聚氰胺和三聚氰酸二酰胺加標型干狗糧樣品。沃特世 TargetLynx? 應用管理軟件可自動處理數據并報告定量分析結果；該軟件通過計算每種化合物的主要和次要 MRM 躍遷之間的離子比，可確定是否存在三聚氰胺和三聚氰酸二酰胺。圖 6 給出了關于三聚氰酸二酰胺的 TargetLynx 瀏覽器界面。