由NAD＋還原反應測定OGDHC總活性的實驗

OGDHC

磷酸鉀 NAD＋ 焦磷酸硫胺素 MgCl2 α-酮戊二酸 二硫赤蘚糖醇 輔酶 A

分光光度計

實驗所需「試劑」具體見「其他」

0.98 ml 實驗混合物

0.02 ml 酶樣品

37 ℃ 時，于 340 nm 處吸收值發生變化，ε₃₄₀＝6.3×10³ l/（mol·cm）。

試劑：

0.1 mol/L 磷酸鉀，pH 7.6

0.1 mol/L NAD^＋（游離酸，Mr＝663.4；663 mg 溶于 10 ml 水中）

0.01 mol/L 焦磷酸硫胺素（ThDP，脫羧輔酶，Mr＝460.8，46.1 mg 溶于 10 ml 水中）

0.1 mol/L MgCl₂（MgCl₂·6H₂O，Mr＝203.3，203 mg 溶于 10 ml 水中）

0.5 mol/L α-酮戊二酸（α-酮戊二酸鹽，2-氧代戊二酸，二鈉鹽，Mr＝190.1，0.95 g 溶于 10 ml 水中）

0.1 mol/L 二硫赤蘚糖醇（DTE，Mr＝154.2，或二硫蘇糖醇，DTT，Mr＝154.2；154 mg 溶于 10 ml 水中）

0.01 mol/L 輔酶 A（游離酸，Mr=767.5，CoA·Li₃，Mr=785.4；23 mg 溶于 3 ml 水中）