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  • 發布時間:2019-11-12 15:57 原文鏈接: 甲基化和異戊烯化作用的檢測實驗

    • 多聚類異戊二烯取代物的確證

    • 羧基甲基化的證實

    實驗材料

    蛋白                                                          

    試劑、試劑盒

    牛血清白蛋白                                                                  氫氧化氨                                                          

    儀器、耗材

    試管                                                          

    實驗步驟1. SDS-PAGE 和電洗脫分離目的蛋白。

    2. 洗脫的蛋白中加牛血清白蛋白載體使最終濃度為 0.1 mg/ml,并用 5 倍體積的含 1.5% 氫氧化氨的冰冷丙酮處理 30 分鐘以沉淀蛋白。

    3. 離心收集沉淀蛋白,倒掉上清,在真空下干躁沉淀物。

    4. 在 0.4 ml 的乙醇:甲酸(4:1 ) 溶液中重懸蛋白,并轉到一個帶玻璃螺絲帽的試管中。



    5. 加 0.1 ml 的拉尼鎳混合液(Aldrich),然后加 1 ml 水飽和戊烷。

    6. 用 Teflon 帶繞細線封緊試管,并用 Teflon 線擰上一個帽。

    7. 在 100℃ 熱塊上加熱試管過夜。

    8. 取出頂層保存在一個新試管中,然后再用 1 毫升戊烷再次抽提底層。

    9. 收集戊烷層于圓錐型樣品瓶中,在鹽水冰浴中蒸發到干燥。

    10. 用 100~200 μl 的己烷清洗試管的側壁,將己烷溶液倒入一個干凈的錐形樣品瓶中,并且蒸發至較少的體積(10~20 μl)。

    11. 通過放射氣相液體色譜法分析樣品,使用 15 m、DB-5、中等極性的百萬孔的柱子去分離并按照下列條件走柱:

    后始溫度,100℃;啟始時間,4 分鐘;速率,每分鐘 10°。最終溫度,300℃;最終時間,1 分鐘。


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