方法名稱： 甲氨蝶呤原料藥－甲氨蝶呤－高效液相色譜法
應用范圍： 本方法采用高效液相色譜法測定甲氨蝶呤原料藥中甲氨蝶呤的含量。
本方法適用于甲氨蝶呤原料藥。
方法原理： 供試品經流動相溶解并定量稀釋，進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長302nm處檢測甲氨蝶呤的峰面積，計算出其含量。
試劑： 1. 乙腈
2. 7.0%枸櫞酸溶液
3. 2.0%無水磷酸氫二鈉溶液
儀器設備： 1. 儀器
1.1 高效液相色譜儀
1.2 色譜柱
十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數按甲氨蝶呤峰計算應不低于1000。
1.3 紫外吸收檢測器
2. 色譜條件
2.1 流動相：乙腈：7.0%枸櫞酸溶液：2.0%無水磷酸氫二鈉溶液=10：10：80
2.2 檢測波長：302nm
2.3 柱溫：室溫
試樣制備： 1. 對照品溶液的制備
精密稱取甲氨蝶呤對照品適量，加流動相溶解并定量稀釋成每1mL中約含0.1mg的溶液，即為對照品溶液。
2.供試品溶液的制備
精密稱取供試品適量，加流動相溶解并定量稀釋成每1mL中約含甲氨蝶呤0.1mg的溶液，即為供試品溶液。
注：“精密稱取”系指稱取重量應準確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。
操作步驟： 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器于波長302nm處測定甲氨蝶呤（C20H22N8O5）的峰面積，計算出其含量。