照高效液相色譜法(通則0512)測定。
避光操作。
供試品溶液取本品適量(約相當于左甲狀腺素38g),精密稱定,置預先充有氮氣的帶螺帽試管中,盡量減少在空氣中暴露的時間,精密加入蛋白水解酶溶液[稱取氯化鈉6.435g、三羥甲基氨基甲烷4.846g和他巴唑5.708g,置l000ml量瓶中,加水溶解并稀釋至刻度,搖勻,必要時用6mol/L鹽酸溶液或0.1mol/L氫氧化鈉溶液調節pH值至8.4士0.05,作為還原性緩沖溶液。
臨用前,取鏈霉蛋白酶(P5147)適量,加還原性緩沖溶液溶解并稀釋制成每1ml中含鏈霉蛋白酶1mg的溶液]5ml。緩緩通入氮氣流5分鐘,蓋上螺帽,搖勻,置帶蓋的水浴中,于37℃±1℃水解28小時,期間不時檢査混合物分散情況,必要時搖勻。
精密加入1%磷酸乙腈溶液2ml,振蕩,以每分鐘2000轉離心5分鐘。取上清液濾過,取續濾液對照品溶液取左甲狀腺素對照品38mg和碘塞羅寧對照品9mg,精密稱定,置100m1量瓶中,加水-乙腈-濃氨溶液(500:500:1)混合溶液50ml,渦旋使溶解,用50%乙腈溶液稀釋至刻度,搖勻,精密量取5ml,置250mI量瓶中,用還原性緩沖溶液稀釋至刻度,搖勻,精密量取5ml,置帶螺帽試管中,精密加人1%磷酸乙腈溶液2ml,振蕩色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以水-乙腈-磷酸(650:350:5)為流動相;檢測波長為230nm;進樣體積20l系統適用性要求理論板數按左甲狀腺素峰計算不低于3000,左甲狀腺素峰、碘塞羅寧峰與相鄰峰的分離度均應符合要求測定法精密量取供試品溶液與對照品溶液,分別注人液相色譜儀,記錄色譜圖。按外標法以峰面積計算。