實驗方法原理
瓊脂糖凝膠電泳作為鑒定大分子物質經常被使用, 但含有RNase 酶活性, 因此要使RNase 變性而不使RNA 變性的, 故采用甲醛變性凝膠電泳鑒定RNA。
實驗材料 RNA
試劑、試劑盒 MOPS乙酸鈉EDTA蔗糖EDTA溴酚藍二甲苯青甲醛
儀器、耗材 電泳槽電泳儀
實驗步驟
1. 制備凝膠: 瓊脂糖濃度1 . 2% , 加入5×甲醛凝膠電泳緩沖液和甲醛, 使兩者的終濃度分別為1×甲醛凝膠電泳緩沖液和2.2 mol/ L;
2. 取一定量的RNA 樣品, 加入5 × 甲醛凝膠電泳緩沖液2 . 0 μl , 37%甲醛3 . 5 μl , 去離子甲酰胺10 . 0 μl , 稍微離心混勻后置65 ℃水浴15 min , 然后迅速置于冰浴中5 min; 加入2 . 0 μl 加樣緩沖液, 稍微離心;
3. 上樣前, 凝膠在1 × 甲醛凝膠電泳緩沖液預電泳5 min(電壓5 V/ cm) ;
4 . 將樣品加到凝膠樣品孔, 以4 V/ cm 電壓進行電泳; 每隔30 min 將陰陽電極液混勻, 然后繼續電泳;
5. 電泳結束后, 將膠放入0 . 5 μg/ ml 的EB 溶液中, 染色30 min; 紫外觀察。