⒈IEF/SDS-PAGE雙向電泳法 1975年O′Farrall等人根據不同組份之間的等電點差異和分子量差異建立了 IEF/SD S-PAGE雙向電泳。其中IEF電泳(管柱狀)為**向,SDS-PAGE 為第二向(平板)。在進行**向IEF電泳時,電泳體系中應加入高濃度尿素、適量非離子型去污劑NP-40。
蛋白質樣品中除含有這兩種物質外還應有二硫蘇糖醇以促使蛋白質變性和肽鏈舒展。IEF電泳結束后,將圓柱形凝膠在SDS-PAGE所應用的樣品處理液(內含SDS、β-巰基乙醇)中振蕩平衡,然后包埋在SDS-PAGE的凝膠板上端,即可進行第二向電泳。IEF/ SDS-PAGE雙向電泳對蛋白質(包括核糖體蛋白、組蛋白等)的分離是極為精細的,因此特別適合于分離細菌或細胞中復雜的蛋白質組分。
⒉毛細管電泳 Neuhoff等人于1973年建立了毛細管均一濃度和梯度濃度凝膠用來分析微量蛋白質的方法,即微柱膠電泳,均一濃度的凝膠是將毛細管浸入凝膠混合液中,使凝膠充滿總體積的2/3左右,然后將其撳入約厚2mm的代用粘土墊上,封閉管底,用一支直徑比盛凝膠的毛細管更細的硬質玻璃毛細管吸水鋪在凝膠上。
聚合后,除去水層并用毛細管加蛋白質溶液(0.1-1.0μl,濃度為1-3mg/ml)于凝膠上,毛細管的空隙用電極緩沖液注滿,切除插入粘土部分,即可電泳。
目前毛細管電泳分析儀的誕生,特別是美國生物系統公司的高效電泳色譜儀為 DNA片段、蛋白質及多肽等生物大分子的分離、回收提供了快速、有效的途徑。高效電泳色譜法是將凝膠電泳解析度和快速液相色譜技術溶為一體,在從凝膠中洗脫樣品時,連續的洗脫液流載著分離好的成分,通過一個連機檢測器,將結果顯示并打印記錄。
高效電泳色譜法既具有凝膠電泳固有的高分辨率,生物相容性的優點,又可方便地連續洗脫樣品。