電泳分離的蛋白質肽譜和序列分析實驗

凍干的純化蛋白樣品

甲酸 氫溴酸 過氧化氫 NaOH 固體

旋轉蒸發器 小試管

1.加入 100ul 過氧化氫到 900ul 甲酸中，在室溫下放置讓，將反應產生過甲酸 (HCOOOH)。

2.在冰上冷凍過甲酸至 0°C。

3.在預冷的小試管中，將蛋白質溶解于 50ul 過甲酸中（500ug/ml)。

4.蓋上帽子，0°C 孵育混合物 4 h。如果蛋白質不溶，把反應延長到 20 h。

5.加入 30ul 氫溴酸，去除多余的過甲酸。

要特別小心，可能會釋放出來少量的溴。

6.用旋轉蒸發器或離心冷凍干燥機徹底干燥樣品。在濃縮器中加入少量的 NaOH 固體，以去掉多余的溴和甲酸。蒸發干燥約需要 10 min。

由于許多氨基酸被修飾，推薦用過甲酸氧化的蛋白質用于 S—S/S—H(半胱磺酸）和甲硫氨酸基團（甲硫氨酸砜）的定量分析，而不是序列分析。