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  • 發布時間:2022-01-18 13:19 原文鏈接: 電泳技術RNA電泳操作步驟

      試劑:

      瓊脂糖(Agarose)、甲醛、甲酰胺、MOPS、EDTA、DEPC水。

      步驟

      一 、5 x MOPS-EDTA Buffer的配制(0.1 M MOPS pH7; 5mM EDTA; 10mM NaAc)

      1. 稱量20.9g的MOPS,置于1L燒杯中。

      2. 加700mL DEPC水溶解。

      3. 用2N NaOH調節pH**7.0

      4. 在上述溶液中加入10mL的1M的NaAC

      5. 溶液中加入10mL的0.5M的EDTA pH=8.0

      6. 加DEPC水定容**1L

      7. 用0.45um濾膜過濾后避光保存

      二、RNA樣品處理方法

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      混合均勻后,70°C加熱5min,迅速冷卻**室溫。(PCR儀操作)

      三、甲醛變性瓊脂糖凝膠的制備

      加1g瓊脂糖到31mL DEPC水中,另加10mL 5 x MOPS-EDTA Buffer煮沸溶解。加入DEPC水定容**41mL。將溶液冷卻**60°C左右,加入9mL 37%甲醛,倒入膠槽中靜置1小時。(膠中加入EB染料)

      四 電泳

      混勻電泳槽中的1 x MOPS-EDTA Buffer電泳液,加樣,10v/cm條件下電泳約1小時。電泳期間每隔15min混勻電泳槽中的電泳液一次。


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