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  • 發布時間:2019-08-08 15:33 原文鏈接: 電泳和Western轉印的常見問題

    表1 Common problems for electrophoresis and western bloting
    問 題可能原因建議解決方法
    推薦電壓條件下電泳時間過長。電泳緩沖液過稀。配制新鮮緩沖液,使用1X稀釋液。
    推薦電壓條件下電流過高,熱量過大。電泳緩沖液過稀。配制新鮮緩沖液,使用1X稀釋液。
    推薦電壓條件下電流過低或無電流。接觸不良。在電泳前移除膠盒底部的封條;確認緩沖液沒過加樣孔;檢查buffer core上導線連接。
    蛋白帶型條狀(streak)上樣過量。
    樣品中鹽濃度過高。
    降低蛋白上樣量。通過透析或凝膠過濾降低樣品中的鹽濃度。
    樣品沉淀。加大樣品中SDS的濃度。
    樣品中的污染,如脂類或DNA 復合物。離心或過濾樣品以除去特定污染。
    制膠不佳。確保灌膠均勻,一次完成。
    條帶模糊。蛋白樣品部分變性。完全變性蛋白。
    蛋白樣品部分還原。確保加入足夠量的DTT或β巰基乙醇。
    電泳時間過長。觀察前面的指示劑染料,掌握恰當的電泳時間。
    啞鈴形條帶或"微笑"條帶。上樣體積過大導致不完全堆積。使用恰當的上樣體積。如果樣品過稀,使用超濾濃縮。
    電泳過程中電場不均勻。如果蛋白濃度已知,上樣時確保對稱。
    分離膠表面不平。在制膠時使分離膠表面水平。
    凝膠過期。在指定的失效期前使用凝膠。


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